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兔血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE) ELISA Kit實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。
洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
封閉更關鍵
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用,因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會降低特異結合,產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同,是*的。它們與開放位點結合并封閉,同時穩(wěn)定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過,它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
抗體濃度須優(yōu)化
我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟,但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。
檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時應加入終止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,那么也無需太擔心,依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化,相信很快就會有漂亮的結果。
兔血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE) ELISA Kit相關產(chǎn)品如下:phospho-PAK1/2/3 (pThr423) antibody 抗磷酸化p21激活激酶1/2/3 (pThr423)抗體 1ml 子科ZIKER
phospho-PKB (pSer473) antibody 抗磷酸化蛋白激酶B抗體 1ml 子科ZIKER
phospho-AR(pSer580)(androgen receptor phospho-Ser580) 磷酸化雄激素受體抗體 0.2ml 子科ZIKER
AKR1B1/ADR(aldose reductase) 醛糖還原酶抗體 0.2ml 子科ZIKER
ARC (ARG3.1 Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) ARC抗體 0.2ml 子科ZIKER
human β-actin polyclonal antibody/FITC 熒光素FITC標記的抗人β-actin多抗 100T 子科ZIKER
human CD3 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標記的抗人CD3單抗 100T 子科ZIKER
ARF6 (ADP-ribosylation factor 6) ADP核糖基化因子6抗體 0.2ml 子科ZIKER
Arfaptin 1(ADP-ribosylation factor interacting protein 1 ) ADP核糖基化因子相互作用蛋白1抗體 0.2ml 子科ZIKER
ARFIP2/arfaptin 2(ADP-ribosylation factor interacting protein 2 ) ADP核糖基化因子結合蛋白2抗體 0.2ml 子科ZIKER
phospho-STAT1 (Tyr701) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 0.1ml 子科ZIKER
phospho-STAT1 (Ser727) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 0.1ml 子科ZIKER
Phospho-Stat2 (Tyr690) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體 0.1ml 子科ZIKER
phospho-STAT3 (Ser727) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 0.1ml 子科ZIKER
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶抗體 0.1ml 子科ZIKER
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶抗體 0.2ml 子科ZIKER
human CD8 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標記的抗人CD8單抗 100T 子科ZIKER
human CD14 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標記的抗人CD14 單抗 100T 子科ZIKER
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶/細胞色素P450/雌激素合成酶抗體 0.1ml 子科ZIKER
Aromatase (Cytochrome p450 19A1; Estrogen synthetase) 芳香化酶/細胞色素P450/雌激素合成酶抗體 0.2ml 子科ZIKER
ACV-A(Activin A) 活化素A抗體 0.1ml 子科ZIKER
ACV-A(Activin A) 活化素A抗體 0.2ml 子科ZIKER
COX(Cytochrome C Oxidase) 細胞色素c氧化酶抗體 0.2ml 子科ZIKER
ARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體 0.1ml 子科ZIKER
phospho-STAT6(Tyr641) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 0.1ml 子科ZIKER
Phospho-Stat4 (Tyr693) 磷酸化信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體 0.1ml 子科ZIKER
phospho-STMN2/SCG10 (Ser50) 磷酸化神經(jīng)生長相關蛋白SCG10抗體 0.1ml 子科ZIKER
ARIP2a(Activin receptor 2A) 激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體 0.2ml 子科ZIKER
Rabbit human IgGF(ab')2 Whole serum 兔抗人IgGF(ab')2抗血清 10ml 子科ZIKER
Rabbit mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清 1ml 子科ZIKER
Rabbit mouse IgG-Fc Whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc抗血清 10ml 子科ZIKER
β-arrestin 1(beta-arrestin 1) β-抑制蛋白1抗體 0.2ml 子科ZIKER
β-arrestin 2(beta-arrestin 2) β-抑制蛋白2抗體 0.2ml 子科ZIKER
ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體 0.2ml 子科ZIKER
ART(Artemin) Artemin抗體 0.2ml 子科ZIKER
ARα1/ADRA1B(α1-adrenergic receptor) α1腎上腺素能受體抗體 0.1ml 子科ZIKER
ARα1/ADRA1B(α1-adrenergic receptor) α1腎上腺素能受體抗體 0.2ml 子科ZIKER
phospho-Syndecan-4 (pSer179) antibody 磷酸化多配體聚糖抗體 1ml 子科ZIKER
phospho-S6-Kinase (pThr421/pSer424) antibody 抗磷酸化S6蛋白激酶抗體 1ml 子科ZIKER