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小鼠層粘連蛋白(LN)ELISA檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2016-06-22 14:11:02瀏覽次數(shù):137次

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小鼠層粘連蛋白(LN)ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)本的采集及保存:
1.血清:標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
●操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。除空白孔外,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul,注意不要有氣泡,輕輕混勻,酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)120分鐘。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。
3. 每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul,37℃,60分鐘。洗板3次,350ul/每孔,甩干。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液 100ul,37℃,60分鐘,洗板5次,甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色30分鐘(此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯)。
6. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng)(此時(shí)蘭色立轉(zhuǎn)黃色)。用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
小鼠層粘連蛋白(LN)ELISA檢測(cè)試劑盒注意:1.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
      2.為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。

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