大鼠Ⅳ型膠原(COL4)ELISA試劑盒●品牌：子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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大鼠Ⅳ型膠原(COL4)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4．反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 （注意：顯色時間供參考，因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異，顯色時間會有所不同。此時肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。 
11．用酶標(biāo)儀在 450nm 測定 OD值。

大鼠Ⅳ型膠原(COL4)ELISA試劑盒結(jié)果判定常用的幾種方法                                  
1) 目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2) 以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3) 以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性；P／N值小于2.1，但大于1.5為可疑；P／N小于1.5為陰性。
定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。

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