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大鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒●品牌:子科生物ZIKER,美國(guó)R&D,美國(guó)immonoway,美國(guó)sciencell,德國(guó)IBL
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大鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒的基本原理
就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng),并通過(guò)酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過(guò)顏色的形式顯現(xiàn)出來(lái)。
(1)將抗原抗體反應(yīng)固相化:即試驗(yàn)中的包被環(huán)節(jié),使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機(jī)制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團(tuán)可以無(wú)選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結(jié)構(gòu),保持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性;
(2)封閉:固相吸附蛋白是非特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,為了保障抗原抗體反應(yīng)的特異性,因此,包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)蛋白封閉。一般認(rèn)為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
(3)抗原抗體反應(yīng):抗原或抗體在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反應(yīng)。 (4)酶反應(yīng):酶可以通過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體連接形成結(jié)合物,當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時(shí)候,被檢測(cè)靶目標(biāo)中也結(jié)合了酶分子。
(5)ELISA試劑盒底物反應(yīng):結(jié)合在抗原抗體中的酶分子,可以促使底物發(fā)生顏色反應(yīng),檢測(cè)人員可以裸眼觀察,可以通過(guò)顏色來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,通過(guò)顏色的深淺判斷標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量,也可借用酶標(biāo)儀在適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)讀取吸光度值。
操作注意事項(xiàng):
● 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
● 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
● 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
● 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
● 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
● 加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
● 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
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