人尿微量白蛋白(mALB)ELISA檢測試劑盒子科生物研發(fā)生產(chǎn),深圳子科生物ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,擁有10年的研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),擁有*的儀器設(shè)備,專業(yè)的技術(shù)人員和*的實(shí)驗(yàn)技術(shù),目前已經(jīng)建立強(qiáng)大的實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)平臺,品牌設(shè)立為:ZIKER 。
人尿微量白蛋白(mALB)ELISA檢測試劑盒?有效期: 4 個(gè)月(4℃);8 個(gè)月(-20℃)。
?保存方法: 2-8℃(頻繁使用時(shí)); -20℃(長時(shí)間不用時(shí))。
?品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
?質(zhì)量保證:我告訴所有產(chǎn)品均需要經(jīng)過質(zhì)檢通過后,才允許出庫!
?適用范圍:實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅供科研參考,不推薦用于臨床診斷結(jié)果。
凡購買我們公司的ELISA相關(guān)系列產(chǎn)品,都可以享受免費(fèi)代測服務(wù),只收取試劑盒的相關(guān)費(fèi)用,實(shí)驗(yàn)檢測和實(shí)驗(yàn)涉及到的試劑全部都是免費(fèi)提供,并可以提供zui終實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析工作。需要代測服務(wù)的客戶,您只需要準(zhǔn)備收集好您的樣本,郵寄到我公司實(shí)驗(yàn)室,本市的銷售人員可以上門取樣本,我公司收到樣本之后正常是在一周內(nèi)給您檢測報(bào)告結(jié)果。
人尿微量白蛋白(mALB)ELISA檢測試劑盒ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
1、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
2、酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
3、酶的底物;
4、陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);
5、結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
6、洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。
實(shí)驗(yàn)所涉及到的儀器如下:
1、酶 標(biāo) 儀
酶標(biāo)比色儀介紹:
酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計(jì)。針對固相載體形式的不同,各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計(jì)。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001,準(zhǔn)確性為lusm1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說,若某孔測得的A值為1.083,則該孔相對于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083lusm0.01(1.073~1.093),復(fù)測定數(shù)次,其A值均應(yīng)1.083lusm0.05(1.078~1.088)在之間。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同,線性范圍常小于可測范圍,比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900,而其線性范圍僅0.000~2.000,這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予注意。
酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15~30℃,使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
測讀A值時(shí),要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2,zui終測得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)參考對應(yīng)儀器說明書。
2、洗 板 機(jī)
3、離 心 機(jī)
4、培 養(yǎng) 箱
實(shí)驗(yàn)測定具體步驟:
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。
4.反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測定 OD值。
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