人內皮素（ET）ELISA檢測試劑盒●品牌：子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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人內皮素（ET）ELISA檢測試劑盒注意事項
☆試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
☆加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性；一般加樣時間控制在10分鐘內，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。
☆孵育：樣品要在密閉的容器內進行孵育，嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。
☆洗滌：洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。
☆反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，10分鐘左右)，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應。
☆建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
☆建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線，試用幾個標本)，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。

Assay procedure
1.  Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.
2.  Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.
3.  Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.
4.  Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 
5.  Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.
6.  Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.
7.  Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not 
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
8.  Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.
Calculation of results
1.This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 
2.First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 
3.To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 
4.Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.
5.The sensitivity by this assay is 10.0 pg/ml
6.Standard curve
Storage：  2-8℃.
validity： six months.

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