柱式法口腔拭子基因組 DNA 抽提試劑盒

保存方法及注意事項：試劑盒中的 Proteinase K 請于 2-8℃存放，其他組分室溫保存，有效期詳見包裝。Buffer ACL 和 Buffer CL 中含有刺激性的化合物，操作過程中應穿上實驗服，戴好乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮膚或眼睛后，請立即用清水或理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)生的幫助。
柱式法口腔拭子基因組 DNA 抽提試劑盒產品介紹：是生工生物工程（上海）股份有限公司研制的一種頰粘膜細胞基因組 DNA抽提試劑盒。本產品采用 Buffer ACL 和 CL 裂解頰粘膜細胞，釋放出基因組 DNA，蛋白質和細胞碎片等雜質通過離心沉淀下來。將上清液轉移到新的離心管中，在結合液的作用下特殊吸附膜選擇性的吸附上清液中的基因組 DNA。通過洗滌液的清洗*除去吸附膜吸附的少量雜質。在洗脫液的作用下吸附膜釋放吸附的基因組 DNA，即獲得高質量的基因組 DNA。采用本產品提取頰粘膜細胞基因組 DNA 無需苯酚、氯仿等有毒試劑。獲得 DNA 的 OD260/OD280 比值一般為 1.7~1.9，抽提的 DNA可直接用于下游實驗。
標準抽提步驟

自備材料：小型高速離心機（zui大離心力 ≥ 12,000 × g）、水浴鍋、2 ml 離心管、無水乙醇和 RNase A 溶液（10 mg/ml）。
每次使用前請檢查 Buffer ACL 和 Buffer CL 是否出現(xiàn)沉淀，如有沉淀，請于 65℃溶解后再使用。
試劑盒初次開啟，按瓶身標簽說明在 Wash Solution 中加入相應量的無水乙醇混勻，在瓶身做好標記。于室溫密封保存（15 ml Wash Solution 加入 45 ml 無水乙醇；30 ml Wash Solution 加入 90 ml 無水乙醇）。
1. 取樣：采用口腔拭子在口腔內壁擦拭6-10次，晾干2 h保存。 為確保樣本不被食物或者飲品污染，取樣前 30 min 內請勿進食和飲水。
2. 將在口腔內壁擦拭過的口腔拭子用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下置于2 ml離心管，向離心管中加入400 μl Buffer PBS。¸ 如果需要無 RNA 的基因組 DNA，可以向離心管中加入 20 μl 10 mg/ml RNase A solution。
3. 向離心管中加入400 μl Buffer ACL，200 μl Buffer CL和20 μl Proteinase K，震蕩混勻，65℃水浴10 min，間或混勻。
4. 向離心管中加入400 μl 無水乙醇，充分混勻，然后將全部溶液和沉淀物轉移至硅膠膜吸附柱內（吸附柱放入收集管中），10000 rpm 離心1 min，倒掉收集管中溶液，將吸附柱放回收集管中。
¸ 吸附柱的zui大容量為 750 µl，需要過兩次吸附柱；如果后續(xù)實驗需要基因組 DNA 濃度不是很高，可以只過一次吸附柱。
5. 向吸附柱中加入500 μl Wash Solution，10000 rpm離心1 min，倒掉收集管中溶液，將吸附柱放回收集管中。¸ Wash Solution 使用前請檢查溶液是否按比例加入無水乙醇。
6. 重復步驟5一次。
7. 將吸附柱放回收集管中，12000 rpm離心2 min。¸ 此步決不能省略，否則殘留的乙醇會嚴重影響后續(xù)實驗。
8. 取出吸附柱，放入一個新的1.5 ml離心管中，在吸附膜中央加入50 μl TE Buffer，靜置3 min，12000 rpm離心2 min，得到DNA溶液置于-20℃保存或者直接用于后續(xù)實驗。¸ 如果想提高 DNA 的得率，可重復步驟 8 或將 TE Buffer 60℃預熱。
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