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紫外線（UV）吸收法測(cè)定核酸的含量2016/6/30
實(shí)驗(yàn)原理核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性質(zhì)，其吸收高峰在260nm波長(zhǎng)處。核酸的摩爾消光系數(shù)（或稱(chēng)吸收系數(shù)）用來(lái)表示。為每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。測(cè)...
單克隆抗體的純化2016/6/29
一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對(duì)腹水進(jìn)行預(yù)處理，目的是為了進(jìn)一步除去細(xì)胞及其殘?jiān)?、小顆粒物質(zhì)、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過(guò)濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡(jiǎn)便。1、...
抗體的保存（子科生物）2016/6/29
抗體的保存方法一般有以下三種：一、腹水腹水重組后可加入少量疊氮納等來(lái)阻止細(xì)菌生長(zhǎng)。腹水應(yīng)當(dāng)凍存。單抗能夠小包裝保存以避免反復(fù)凍融。若要保存較長(zhǎng)時(shí)間，則不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，會(huì)使抗體...
小分子抗原制備要點(diǎn)和注意事項(xiàng)2016/6/28
小分子抗原現(xiàn)在做的zui多的是農(nóng)yao和獸藥，這方面的文獻(xiàn)也很多。以前查過(guò)一些材料，作者覺(jué)得小分子抗原能否制備出高性能的單克隆抗體主要以下幾點(diǎn)決定。1、對(duì)于半抗原結(jié)構(gòu)的選擇，如果待測(cè)物本身含有NH2，...
大鼠和小鼠尾靜脈注射技巧與經(jīng)驗(yàn)分享2016/6/28
一、將小鼠固定好，將尾巴拉直，繃緊小鼠姓情較溫順，一般不會(huì)咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上，在小鼠向前掙扎爬行時(shí)，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將小...
免疫血清的制備及效價(jià)測(cè)定2016/6/27
制備免疫血清的傳統(tǒng)方法是將抗原注入動(dòng)物體內(nèi)，由動(dòng)物體內(nèi)B細(xì)胞增殖分化成漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。由于抗原分子（*抗原）具有多種抗原決定簇，每一種抗原決定簇可以激活具有相應(yīng)抗原受體的B細(xì)胞系產(chǎn)生該決定簇的抗體，因...
常用抗原修復(fù)方法（子科生物）2016/6/27
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片：1）抗原熱修復(fù)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件，選用微波爐抗原修復(fù)、高壓鍋抗原修復(fù)或水浴高溫抗原修復(fù)。抗原熱修復(fù)可選用各種緩沖液，如TBS、PBS、重金屬鹽溶液等，但實(shí)驗(yàn)證明...
生物分子類(lèi)實(shí)驗(yàn)室常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理總結(jié)2016/6/24
一、gstpull-down實(shí)驗(yàn)基本原理:將靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹(shù)脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當(dāng)一種“誘餌蛋白”,目的蛋白溶液過(guò)柱,可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”...
ELISA實(shí)驗(yàn)中的封閉液等常用試劑的配制2016/6/23
elisa實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識(shí)ELISA的試劑盒說(shuō)明上寫(xiě)封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn)，蔗糖封閉的原理：1、ELISA實(shí)驗(yàn)中，蔗糖本身沒(méi)有封閉作用;2、封閉液一般是BS...
細(xì)胞凋亡檢測(cè)操作步驟之ELISA法2016/6/23
細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí)，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA，但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割，單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu)，可通過(guò)檢測(cè)核小體判斷細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡事件。(一)原理細(xì)胞凋...
減少ELISA實(shí)驗(yàn)中背景因素的影響2016/6/22
elisa實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，我們是否能獲得有意義的...
檢測(cè)蛋白磷酸化的六種方法及其優(yōu)缺點(diǎn)2016/6/22
蛋白激酶將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到蛋白多肽底物上的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基，直接影響目標(biāo)的活性和功能。放射性研究表明，真核細(xì)胞中大約30%的蛋白經(jīng)過(guò)磷酸化修飾。這一關(guān)鍵的翻譯后修飾調(diào)控了廣泛的細(xì)胞活性...
中國(guó)科學(xué)家新建立一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法2016/6/22
中國(guó)國(guó)民核生化災(zāi)害防護(hù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室防化研究院的研究人員利用elisa技術(shù)以劇毒生物毒素相思子毒素(Abrin)為檢測(cè)對(duì)象，建立了一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法。該論文已發(fā)表于近期的《分析化學(xué)》雜...
EMSA實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)及常見(jiàn)問(wèn)題分析2016/6/21
1.什么是凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)?凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目...
三種細(xì)胞免疫熒光染色操作步驟2016/6/21
免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來(lái)顯示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗結(jié)合，其次是帶有熒光基團(tuán)的二抗識(shí)別并結(jié)合一抗，熒光顯微鏡下即可觀察到熒光，下文主要列舉了三種細(xì)胞免疫熒光染色的實(shí)驗(yàn)...
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