半固體瓊脂穿刺法

根據(jù)有鞭毛的細(xì)菌可以在半固體培養(yǎng)基中游動卻又不能任意游走的現(xiàn)象，觀察細(xì)菌生長情況，判定試驗菌是否有運動性?？墒褂迷囼灳芰己蒙L的培養(yǎng)基，在其中加0.3%~0.6%的瓊脂，（所用的瓊脂量可因牌號不同而異）一般半固體培養(yǎng)基應(yīng)是放倒試管不流動，而在手上輕輕敲打時瓊脂即破裂為宜。對一般常見細(xì)菌可結(jié)合葡萄糖氧化發(fā)酵試驗觀察運動性。

用直針穿刺接種試驗菌于半固體培養(yǎng)基內(nèi)，適溫培養(yǎng)。細(xì)菌的運動性可用透射光目測。如生長物只生長在穿刺線上，邊緣十分清晰，則表示試驗菌無運動性；如生長物由穿刺線向四周呈云霧狀擴(kuò)散，其邊緣呈云霧狀，則表示試驗菌株有運動性。對生長快的細(xì)菌應(yīng)培養(yǎng)1天后觀察。如*天不能判定可在第2?3天再觀察。如2~3天時仍不能判定是否有運動性，可延遲5~6天再觀察一次。因為游動力弱的細(xì)菌，在半固體培養(yǎng)基中第1-2天中尚不能從穿刺線游開，故需多培養(yǎng)幾天觀察。如試驗菌在半固體培養(yǎng)基中產(chǎn)氣，氣泡會將穿刺線上的生長物的擴(kuò)散情況，不可誤將不運動的細(xì)菌判為有運動性。如試驗菌是好氧細(xì)菌，穿刺線上生長物很少，可檢查從培養(yǎng)基表面向下滲入的生長物的情況。

（二）鏡檢法

用顯微鏡檢查細(xì)菌細(xì)胞是否能游動，可用普通顯微鏡或相差顯微鏡檢查。用普通顯微鏡時光線不宜太強，要適當(dāng)減弱。檢查時應(yīng)注意以下幾點：

(1)細(xì)菌細(xì)胞間有明顯位移者，才能判定為運動性。由于細(xì)菌細(xì)胞太小，在懸液中有布朗運動，即每個細(xì)胞均在原地顫動，彼此的位置關(guān)系卻沒改變，切不可將這種現(xiàn)象誤判為具運動性。由于載片與蓋片之間懸液過多，在使用油浸物鏡調(diào)焦時，懸液在蓋玻片下流動。這時可看到大批細(xì)菌細(xì)胞都以同一速度向同一方向運動，這也不是真正的運動性。真正的運動性應(yīng)是細(xì)菌細(xì)胞彼此的位置關(guān)系明顯的改變。細(xì)菌的運動性因種或菌株而異。有的運動迅速，有的運動緩慢。能運動的菌株也不一定每個細(xì)胞都同時運動，常常是大多數(shù)細(xì)胞不運動。少數(shù)細(xì)胞明顯運動。

(2)有些細(xì)胞不以鞭毛運動，而是滑動。鏡檢時應(yīng)注意與游動區(qū)分開。一般游動速度高，滑動則遲緩。游動只能在懸液中運動，滑行則須附在固體表面進(jìn)行。

(3)如室溫太低，以致載物臺溫度太低。有的細(xì)菌會因溫度太低而不能運動，應(yīng)設(shè)法提高載物臺或載玻片的溫度，達(dá)到試驗菌能運動的溫度（如在室溫較高的試驗室鏡檢，或?qū)⑤d玻片放置保溫箱中一會兒再觀察）。

(4)鏡檢好氧菌時，則可能因蓋玻片下供氧不足而使試驗菌不能表現(xiàn)出運動性，遇到這種情況則應(yīng)使蓋玻片下殘留一二個小氣泡，鏡檢氣泡四周或蓋片邊緣處的細(xì)菌運動性。

（5）用油鏡檢吋，蓋玻片的厚度以不超過0.17mm為宜。用過厚的蓋玻片時，調(diào)焦有困難。用相差油鏡觀察時載玻片的厚度約為1.2mm為宜。