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ELISA實驗方法之競爭法檢測抗原及...

2019-6-27  閱讀(7129)

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    上次給大家介紹的雙抗體夾心法不知道大家還有印象嗎?如果已經(jīng)忘記了,哈哈沒有關(guān)系,可以翻閱下我們的上一篇文章哦,今天給大家介紹的是另外的兩種方法哦,請看!

    競爭法檢測抗原

    當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的抗體結(jié)合位點,因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定,可以采用競爭法模式。經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液,而另一組只加酶標(biāo)記抗原,再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

    競爭法的簡要操作步驟:

    1)先加入抗體,使抗體固定結(jié)合于載體表面;

    2)加入梯度濃度比例的待測樣品與酶標(biāo)抗原混合物,同時做只加酶標(biāo)抗原的對照組;

    3)加入酶促反應(yīng)底物,發(fā)生顯色反應(yīng),對比實驗組及對照組的顯色差異,計算未知抗原的量。

    雙抗原夾心法檢測抗體

    雙抗原夾心法的反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標(biāo)記方法。

    雙抗原夾心法的簡要操作步驟為:

    1)先加入抗原,使抗體固定結(jié)合于載體表面;

    2)再加樣品,使目標(biāo)檢測抗體形成抗原-抗體復(fù)合物;

    3)加酶標(biāo)抗原;

    4)加入酶促反應(yīng)底物,發(fā)生顯色反應(yīng),顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

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