(1)抗噬菌體菌株的選育

①高濃度噬菌體原液的制備選育抗噬菌體菌株需要相應的專一性噬菌體作為選擇性因子，因此，選育抗噬菌體菌株，必須首先制備高濃度的噬菌體原液。而制備高濃度的噬菌體原液．首先要分離獲得噬菌體，并純化，然后制備高濃度的噬菌體原液。ELISA試劑盒

專一性噬菌體的獲得和純化：在培養(yǎng)皿上挑取被噬菌體感染后形成的噬菌斑，移接到吉有1％蛋白胨培養(yǎng)液中培養(yǎng)，然后用雙層瓊脂法進行多次連續(xù)分離，直至出現(xiàn)的噬菌斑形狀大小基本一致。

價噬菌體原液的制備：將已純化的噬菌體接種到處于對數(shù)期的敏感菌培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)10h左右，此時已有較多噬菌體釋放。將培養(yǎng)液離心，取含有噬菌體的上清液，再次接種到處于對數(shù)期的敏感菌培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)后，用細菌濾器過濾，即得到價噬菌體原液。

噬菌體原液效價測定：效價指每毫升液體中含有噬菌體的數(shù)量，通常用“U/mL”表示。具體做法是用1％蛋白胨溶液作為稀釋劑，稀釋后用雙層瓊脂法進行定量測定，計算公式如下：

效價=平均每皿噬菌斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×取樣量折算ELISA試劑盒

②誘變與噬菌體抗性菌株的分離 單孢子懸浮液經(jīng)誘變后涂布在含有噬菌體的平板上篩選噬菌體抗性菌落。

③液體搖瓶振蕩培養(yǎng) 從含有噬菌體的平皿上篩選得到的抗性菌株，要進一步進行液體搖瓶振蕩培養(yǎng)。在搖瓶培養(yǎng)至對數(shù)期時，加入一定量的價噬菌體原液．繼續(xù)培養(yǎng)，觀察菌體消失，而后又重新再生。此時將再生菌體移入新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)至對數(shù)期，加入價噬菌體原液，再培養(yǎng)。如此反復3～4次后，再將其分離到含噬菌體的平皿上，挑取單菌落移人斜面，并在斜面上滴加噬菌體原液，培養(yǎng)后觀察滴加噬菌體原液處的菌落生長情況。選取生長正常的菌體細胞，再進行搖瓶復篩。經(jīng)觀察和測定，選取生長正常、產(chǎn)物產(chǎn)量高的菌株，保存。

④進一步考察抗性菌株對周圍環(huán)境中存在的各種噬菌體的抗性。

(2抗性菌株的特性研究

①抗性菌株穩(wěn)定性試驗穩(wěn)定性是指已選育到的抗性菌株對噬菌體的抗性是否穩(wěn)定以及經(jīng)過傳代后的抗性菌株對噬菌體的抗性是否穩(wěn)定。選育到的抗性菌株要分別接種到含有高濃度噬菌體的斜面培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，然后采用雙層瓊脂法測定。如不出現(xiàn)噬菌斑，說明抗性是穩(wěn)定的。對選育到的抗性菌株，還要進行傳代試驗，傳代后再用上述同樣方法測定其對噬菌體的抗性。

    在實際工作有時會把由溶源性引起的免疫性誤認為是抗性。因此，要區(qū)分溶源性菌株與抗性菌株。常采用誘變因子誘導菌株的方法來區(qū)分，如是溶源性菌株，則可釋放噬菌體；如是抗性菌株，則不會出現(xiàn)這種現(xiàn)象。

②抗性菌株的產(chǎn)量性能抗噬菌體菌株，除對噬菌體的抗性要求外，其產(chǎn)量要求保持與敏感菌株相同或者更高。

    因為對噬菌體的抗性是由基因突變引起的，所以抗噬菌體菌株在代謝過程中某些酶的活性也可能會有所改變．即抗性菌株的發(fā)酵特性可能會發(fā)生變化。因此，需要對抗噬菌體菌株的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，使抗性菌株能發(fā)揮zui大的生產(chǎn)能力。ELISA試劑盒