1．elisa試劑盒樣品稀釋 一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)斷定,以確保實(shí)驗(yàn)的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反響是一種敏感性很高的反響,如果血清不稀釋,不行防止會(huì)發(fā)生很強(qiáng)的非特異性反響,呈現(xiàn)假陽(yáng)性.

2．試劑盒平衡Elisa中一切試劑和板條均應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時(shí)刻太短會(huì)形成試劑混勻不行,樣品孵育時(shí)刻相對(duì)縮短,ELISA反響不行充沛.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

3．樣品和試劑的混勻 在稀釋前、后的樣品有必要充沛混勻,一切試劑在加樣前也須搖勻,以確保實(shí)驗(yàn)的均一性.

4．加樣加樣是一項(xiàng)很重要的過(guò)程.加樣不行太快,要防止加在孔壁上部,不行濺出和發(fā)生氣泡.加樣太快,無(wú)法確保微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附.

5．溫育溫育是elisa試劑盒測(cè)定中影響測(cè)定勝敗zui為要害的一個(gè)要素.ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反響在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,有必要在必定的溫度條件下反響必定的時(shí)刻.

6．洗板固相免疫測(cè)定技能是一種非均相免疫測(cè)定技能,需以洗刷操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反響溫育過(guò)程中吸附的非特異成份別離開(kāi)來(lái),以確保ELISA測(cè)定的特異性.洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,必定要大力拍干；及時(shí)替換吸水紙,尤其是拍過(guò)酶符號(hào)物的吸水紙必定要棄去,否則可能影響實(shí)驗(yàn)成果.

7．顯色顯色必定要控制時(shí)刻,依據(jù)試劑盒闡明操作即可.一般來(lái)說(shuō),顯色時(shí)刻過(guò)短,成果偏低；顯色時(shí)刻過(guò)長(zhǎng),空白增高或許非特異性顯色添加.

8．elisa試劑盒比色要注意波長(zhǎng)的選擇.以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有運(yùn)用,而前者比色波長(zhǎng)為450nm,后者為492nm,濾光片需依據(jù)要求隨時(shí)替換.因此,簡(jiǎn)單呈現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問(wèn)題.