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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>ELISA常用方法優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)對(duì)比
我們知道,ELISA法可分為多種類(lèi)型測(cè)定,是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技能。 我公司技能部將各種ELISA常用辦法的優(yōu)勢(shì)下風(fēng)進(jìn)行比照,成果如下:
一、直接法:將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號(hào)的一級(jí)抗體,即可測(cè)定抗原總量,此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)略,因無(wú)須使用二抗可防止交互反響。
下風(fēng):實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào),但不是每種抗體都適合做符號(hào),費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。
二、間接法:此測(cè)定辦法與直接法類(lèi)似,不同在于一級(jí)抗體沒(méi)有酶符號(hào),改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。
優(yōu)勢(shì):二抗能夠加強(qiáng)信號(hào),并且有多種挑選能做不同的測(cè)定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保存它zui多的免疫反響性。
下風(fēng):交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
三、雙抗體夾心法:被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體,此抗體可用酶符號(hào)后直接測(cè)定抗原的量;或不符號(hào),再透過(guò)酶符號(hào)的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選取,才可防止交互反響或競(jìng)賽相同的抗原結(jié)合部位。
優(yōu)勢(shì):高活絡(luò)、高專(zhuān)一性,抗原無(wú)須事前純化。
下風(fēng):抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。
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