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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA試劑盒這些操作方法你知道多少

時(shí)間:2017-1-4閱讀:343
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如何選擇ELISA試劑盒
*步、清晰檢查何種蛋白 。
第二步、清晰編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性。
第三步、尋覓檢查這些物種蛋白的試劑盒。
第四步、咨詢商家ELISA是試劑盒運(yùn)用的抗體類型:多抗仍是單抗? 單抗是對(duì)于什么抗原決定簇的?
第五步、 做出自己的判別該買哪個(gè)試劑盒。

ELISA試劑盒試驗(yàn)操作過程
1.運(yùn)用前,將一切試劑充沛混勻。不要使液體發(fā)生很多的泡沫,防止加樣時(shí)參加很多的氣泡,發(fā)生加樣上的差錯(cuò)。
2.依據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上規(guī)范品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)規(guī)范品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品依據(jù)自己的數(shù)量來定,能運(yùn)用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后參加50ul于反響孔內(nèi)。
3.參加稀釋好后的規(guī)范品50ul于反響孔、參加待測(cè)樣品50ul于反響孔內(nèi)。當(dāng)即參加50ul的*符號(hào)的抗體。蓋上膜板,悄悄振動(dòng)混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動(dòng)30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
5.每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP,悄悄振動(dòng)混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗刷液,振動(dòng)30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗刷,洗刷次數(shù)添加一次。
7.每孔參加底物A、B各50ul,悄悄振動(dòng)混勻,37℃溫育10分鐘。防止光照。
8.取出酶標(biāo)板,敏捷參加50ul停止液,參加停止液后應(yīng)當(dāng)即測(cè)定成果。
9.在450nm波利益測(cè)定各孔的OD值。

ELISA試劑盒操作時(shí)應(yīng)該注意哪些?
1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽闡明書儲(chǔ)存,運(yùn)用前康復(fù)到室溫。稀稀往后的規(guī)范品應(yīng)丟掉,不行保留。
2.試驗(yàn)中不必的板條應(yīng)當(dāng)即放回包裝袋中,密封保留,防止蛻變。
3.不必的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前運(yùn)用。
4.運(yùn)用一次性的吸頭防止穿插污染,汲取停止液和底物A、B液時(shí),防止運(yùn)用帶金屬有些的加樣器。
5.運(yùn)用潔凈的塑料容器配置洗刷液。運(yùn)用前充沛混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗刷酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充沛拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反響孔中吸水。
7.底物A應(yīng)揮發(fā),防止長(zhǎng)期翻開蓋子。底物B對(duì)光靈敏,防止長(zhǎng)期露出于光下。防止用手觸摸,有毒。試驗(yàn)完成后應(yīng)當(dāng)即讀取OD值。
8.參加試劑的次序應(yīng)共同,以確保一切反響板孔溫育的時(shí)刻一樣。
9.按照闡明書中標(biāo)明的時(shí)刻、加液的量及次序進(jìn)行溫育操作。

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