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人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒

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更新時間:2016-05-19 03:52:50瀏覽次數(shù):201次

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人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒   ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

   (1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒   

       2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH9.09.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 1824小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.11.010μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為110μg/ml。
  ?。?font face="Times New Roman">3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取方陣法(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。

  ?。?font face="Times New Roman">4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMBABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
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  ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚*千份標本,因此,也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,
進口分裝:

   檢測范圍和靈敏度不同,用量少時,可使用分裝,前期是它的*性不是很好。

   試劑盒的標準曲線zui高點OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。

   試劑盒的標準曲線相關系數(shù)R≥0.99

   試劑盒重復性好,板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<9 %。

   試劑的組份都多給20%的富余量,確保完成48/96孔的檢測,避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

   檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作,保證實驗結(jié)果的重復性。

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