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培養(yǎng)基免疫學(xué)方法檢測細菌抗原或抗體的方法簡介

時間:2014-8-4閱讀:1246
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培養(yǎng)基免疫學(xué)方法檢測細菌抗原或抗體的方法簡介

  在細菌診斷中利用免疫學(xué)的各種方法日益受到人們的極大關(guān)注,從而簡化了病原微生物的鑒定手續(xù)。

  1.抗血清凝集技術(shù)

  培養(yǎng)基早在1933年,Lancefield就成功地用多價血清對鏈球菌進行了血清分型。隨著抗體制備技術(shù)的進一步完善,尤其是單克隆抗體的制備,明顯提高了細菌凝集實驗的特異性,今天廣泛用于細菌的分型和鑒定,如沙門氏菌、霍亂弧菌等。

  2.乳膠凝集實驗

  將特異性的抗體包被在乳膠顆粒上,通過抗體與相應(yīng)的細菌培養(yǎng)基抗原結(jié)合,產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。通常此法需獲得細菌純培養(yǎng)物,再將培養(yǎng)物與致敏乳膠反應(yīng)。業(yè)已用于鑒定大腸桿菌O157;H7 。

  3.熒光抗體檢測技術(shù)

  用于快速檢測細菌的熒光抗體技術(shù)主要有直接法和間接法。培養(yǎng)基直接法是在檢測樣品上直接滴加已知特異性熒光標記的抗血清,經(jīng)洗滌后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。間接法是在檢樣上滴加已知的細菌特異性抗體,待作用后經(jīng)洗滌,再加入熒光標記的第二抗體。如研制成的抗沙門氏菌熒光抗體,用于750份食品樣品的檢測,結(jié)果表明與常規(guī)培養(yǎng)法符合率基本一致。

  4.協(xié)同凝集試驗(COA)

  培養(yǎng)基業(yè)已證實,葡萄球菌A蛋白(SPA)具有與人及各種哺乳動物IgG的Fc段結(jié)合的能力,而不影響抗體Fab段的活性。近年來國內(nèi)外學(xué)者采用抗體致敏的SPA檢測細菌即協(xié)同凝集試驗。如Rahman等用協(xié)同凝集試驗鑒定霍亂弧菌O1群的初代分離物做快速篩選,比常規(guī)法節(jié)省時間,對204份材料用兩種方法比較表明協(xié)同凝集試驗具有較高的特異性和敏感性。

  5.酶聯(lián)免疫測試技術(shù)

  酶聯(lián)免疫技術(shù)的應(yīng)用,大大提高了檢測的敏感性和特異性,現(xiàn)已廣泛地應(yīng)用在病原微生物培養(yǎng)基的檢驗。

  應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)制造的mini-Vidas全自動免疫分析儀,是用熒光分析技術(shù)通過固相吸附器,用已知抗體來捕捉目標生物體,培養(yǎng)基然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合,經(jīng)充分沖洗,通過激發(fā)光源檢測,即能自動讀出發(fā)光的陽性標本,其優(yōu)點是檢測靈敏度高,速度快,可以在48小時的時間內(nèi)快速鑒定沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、單核李斯特菌,空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等。

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