小鼠α（AMS）elisa試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

小鼠α（AMS）elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠α(AMS)水平。 用純化的小鼠α(AMS)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入α(AMS)，再與 HRP 標(biāo)記的α(AMS)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的α(AMS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中小鼠α(AMS)濃度。
試劑盒組成：
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（480µmol/L） 0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說(shuō)明書(shū)  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張
6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)
標(biāo)本要求：
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
小鼠α（AMS）elisa試劑盒操作步驟：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
240µmol/L  5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120µmol/L  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60µmol/L  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30µmol/L  2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15µmol/L  1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl， 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值） ，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
保存條件及有效期：
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．小鼠α（AMS）elisa試劑盒有效期：6 個(gè)月