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植物鈣調(diào)素ELISA試劑盒說明書

2017年01月17日 10:25:28人氣:258來源:上海一研生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞植物鈣調(diào)素ELISA試劑盒,ELISA試劑盒
【資料簡介】

植物鈣調(diào)素ELISA試劑盒說明書

植物鈣調(diào)素ELISA試劑盒組成

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品(320ng/L)  0.5ml×1 瓶

3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份

5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張

6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個

植物鈣調(diào)素ELISA試劑盒標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能

馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

植物鈣調(diào)素ELISA試劑盒操作步驟

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋: 本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支, 用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀

釋。

160ng/L  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

80ng/L  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40ng/L  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20ng/L  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10ng/L  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,

然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍) 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡

量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復(fù) 5 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。

7.  溫育:操作同 3。

8.  洗滌:操作同 5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色) 。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié) :

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式, 將樣品的 OD 值代入方程式, 計算出樣品濃度, 再乘以稀釋倍數(shù),

即為樣品的實際濃度。

植物鈣調(diào)素ELISA試劑盒注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值

大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值) ,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存: ;2-8℃。

2.有效期:6 個月

上海一研生物科技有限公司作者

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