ELISA試劑盒用于檢測未知抗體的間接法

【資料簡介】

    ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。ELISA試劑盒顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

    本法為ELISA試劑盒直接法，所測的工作濃度與在實際應(yīng)用中的zui適濃度可相差幾個滴度。這就要求在建立ELISA實驗系統(tǒng)中，因此基礎(chǔ)上還應(yīng)進(jìn)一步確定實際工作濃度(可采用方陣法)，以達(dá)到zui適的實驗條件。ELISA試劑盒我們知道其中ELISA有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物。
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；
（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；
（3）酶的底物；
（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測定中）；
（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；
（6）洗滌液；
（7）酶反應(yīng)終止液。

1.  用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

2.  加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3.  于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

4.  加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.  終止反應(yīng)

6.  結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA試劑盒檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。