雞減蛋綜合征病毒抗體（EDSV Ab）試劑盒說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

雞減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用。

96T

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)表

達(dá)。 實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)表達(dá)。用純化的抗

原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)相結(jié)合，經(jīng)洗滌 除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-抗原復(fù)合物， 經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下 轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較， 從而判定標(biāo)本中雞減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)的存在與否。

試劑盒組成

1	30 倍濃縮洗滌液	20ml×1 瓶	7	終止液	6ml×1 瓶
2	酶標(biāo)試劑	6ml×1 瓶	8	陽(yáng)性對(duì)照	0.5ml×1 瓶
3	酶標(biāo)包被板	12 孔×8 條	9	陰性對(duì)照	0.5ml×1 瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1 瓶	10	說(shuō)明書(shū)	1 份
5	顯色劑 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 張
6	顯色劑 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.     編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.    加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.     溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

7.     溫育：操作同 3。

8.     洗滌：操作同 5。

9.     顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.   測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)陰性 陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)陽(yáng)性

。

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時(shí)必須 注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月

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