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細(xì)胞的碘化丙啶染色用于FACS分析
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- 【資料簡(jiǎn)介】
FACS用于研究細(xì)胞組分DNA,碘化丙啶(PI)嵌入核酸雙鏈中并可以發(fā)熒光。它不能進(jìn)入活細(xì)胞,但是可以進(jìn)入正在或者已經(jīng)死亡的細(xì)胞。因此PI可以用于免疫熒光染色來鑒定死細(xì)胞。DNA染色可以用于研究細(xì)胞周期。相對(duì)的DNA含量可以堅(jiān)持G1,G2和S期細(xì)胞的比例。在DNA染色中凋亡的細(xì)胞有*的顏色。
一、材料和試劑
1. TritonX-100(SigmaCatalogNo.T9284)2. 碘化丙啶(SigmaCatalogNo.P-4170)
3. 乙醇
4. RNaseA(SigmaCatalogNo.R4642)
二、儀器
1. 離心機(jī)2. 流式細(xì)胞儀器(FACS)
三、步驟
1. 處理和收集細(xì)胞,將細(xì)胞固定到0.5 ml 70%EtOH(預(yù)冷到-20°C過夜)。2. 存儲(chǔ)固定的細(xì)胞到冰上至少一個(gè)小時(shí)zui多到幾天。
3. 離心細(xì)胞2 min,4 000 rpm。
4. 在含有0.25%TritonX-100的0.5 ml PBS溶液中重懸細(xì)胞,并且在冰上孵育15 min。
5. 離心細(xì)胞2 min,4 000 rpm。
6. 棄掉上清液,并在含有10 μg/ml RNaseA和20 μg/ml PI儲(chǔ)存液的0.5 ml PBS重懸細(xì)胞,轉(zhuǎn)移到FACS管子中在黑暗中室溫孵育30分鐘。
7. 準(zhǔn)備做FACS。
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