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技術(shù)中心

動物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

2014年12月19日 09:44:31人氣:523來源:上海哈靈生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞檢測試劑盒,檢測試劑盒說明書,試劑盒說明書
【資料簡介】

主要用途

動物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑是一種旨在使用化學(xué)方法,快速有效地裂解動物細(xì)胞,通過高速離心,獲得澄清細(xì)胞裂解懸液,在β-半乳糖苷酶反應(yīng)體系里,以人工合成的二惡二酮化合物作發(fā)光底物,水解所產(chǎn)生的發(fā)光產(chǎn)物,通過發(fā)光探測儀(Luminometer)測定其相對冷光單位(RLU的變化,以此進(jìn)行測算酶活性而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和其它分子生物學(xué)研究。其適用于轉(zhuǎn)基因后活體細(xì)胞外源性以及衰老細(xì)胞內(nèi)源性半乳糖苷酶活性分析。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,操作簡便、高度敏感。

技術(shù)背景

大腸桿菌的標(biāo)志基因Lac Z編碼β-半乳糖苷酶(β-galactosidase ; β-gal),在其催化作用下,半乳糖可從乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常穩(wěn)定,對蛋白水解降解作用抗性強(qiáng),且容易測試。因此β-半乳糖苷酶成為目前zui常用的報告基因,以評價載體轉(zhuǎn)染的效果。在衰老細(xì)胞內(nèi),顯示β-半乳糖苷酶活性。甲氧基二惡二酮氯代金剛烷苯基吡喃半乳糖苷3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside,是一種二惡二酮dioxetane發(fā)光底物,以替代乳糖,在β-半乳糖苷酶(pH7.8)的催化下,去糖基化后,產(chǎn)生二惡二酮,進(jìn)而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化銨和熒光素鈉poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein的啟動反應(yīng)作用下,同時pH調(diào)整到12,由此二惡二酮分解,發(fā)出冷光,在冷光儀(475nm波長),檢測發(fā)光信號,來測定β-半乳糖苷酶的活性。其發(fā)光產(chǎn)物半衰期為10分鐘,檢測敏感度可達(dá)20飛克(fg)。

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