動物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

【資料簡介】

主要用途

動物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑是一種旨在使用化學(xué)方法，快速有效地裂解動物細(xì)胞，通過高速離心，獲得澄清細(xì)胞裂解懸液，在β-半乳糖苷酶反應(yīng)體系里，以人工合成的二惡二酮類化合物作為發(fā)光底物，水解所產(chǎn)生的發(fā)光產(chǎn)物，通過發(fā)光探測儀（Luminometer）測定其相對冷光單位（RLU）的變化，以此進(jìn)行測算酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和其它分子生物學(xué)研究。其適用于轉(zhuǎn)基因后的活體細(xì)胞外源性以及衰老細(xì)胞內(nèi)源性半乳糖苷酶活性分析。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，操作簡便、高度敏感。

技術(shù)背景

大腸桿菌的標(biāo)志基因Lac Z編碼β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ； β-gal），在其催化作用下，半乳糖可從乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常穩(wěn)定，對蛋白水解降解作用抗性強(qiáng)，且容易測試。因此β-半乳糖苷酶成為目前zui常用的報告基因，以評價載體轉(zhuǎn)染的效果。在衰老細(xì)胞內(nèi)，顯示β-半乳糖苷酶活性。甲氧基二惡二酮氯代金剛烷苯基吡喃半乳糖苷（3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside），是一種二惡二酮（dioxetane）類發(fā)光底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶（pH7.8）的催化下，去糖基化后，產(chǎn)生二惡二酮，進(jìn)而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化銨和熒光素鈉（poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein）的啟動反應(yīng)作用下，同時pH調(diào)整到12，由此二惡二酮分解，發(fā)出冷光，在冷光儀（475nm波長）下，檢測發(fā)光信號，來測定β-半乳糖苷酶的活性。其發(fā)光產(chǎn)物半衰期為10分鐘，檢測敏感度可達(dá)20飛克（fg）。