總RNA的提?。═rizol法提取）

【資料簡(jiǎn)介】

　　在收集到生物材料之后，能即可進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時(shí)，將儲(chǔ)存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。
　　
　　1.提取組織RNA時(shí)，每50~100mg組織用1mlTrizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解：提取細(xì)胞RNA時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5~106個(gè)細(xì)胞加1mlTrizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞；
　　
　　2.將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中，在試問(wèn)15~30℃下放置5分鐘；
　　
　　3.在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15~30℃）放置2~3分鐘后，12000g（2~8℃）離心15分鐘；
　　
　　4.去上層水相置于新EP管中，按照每1mlTrizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15~30℃）放置10分鐘后，12000g（2~8℃）離心10分鐘；
　　
　　5.棄上清，按照每1mlTrizol加1ml75%乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2~8℃）離心5分鐘，棄上清；
　　
　　6.讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥；
　　
　　7.用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。