雞腦脊髓炎病毒抗體（AEV Ab）試劑盒使用說明書

【資料簡介】

 

使用目的：

本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中腦脊髓炎病毒抗體（AEV Ab）表達。 

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中雞腦脊髓炎病毒抗體（AEV Ab）表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中腦脊髓炎病毒抗體（AEV Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值） ，與CUTOFF值相比較，從而判定標本中雞腦脊髓炎病毒抗體（AEV Ab）的存在與否。

試劑盒組成  

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  陽性對照  0.5ml×1 瓶

3  酶標包被板  12 孔×8條  9  陰性對照  0.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份

5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張   

6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個

標本要求  

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。    

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。  

7. 溫育：操作同3。 8.  洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算和結(jié)果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為腦脊髓炎病毒抗體（AEV Ab）陰性

陽性判定：樣品OD 值≥  臨界值（CUT OFF）者為腦脊髓炎病毒抗體（AEV Ab）陽性 。  

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。 2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存： ；2-8℃。

2．有效期：6個月