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人*多聚*(FPGS)酶聯(lián)免疫檢測 試劑盒使用說明書

2012年12月04日 11:44:03人氣:831來源:上海都宜生物科技有限公司

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【資料簡介】

 人*多聚*(FPGS)酶聯(lián)免疫檢測

試劑盒使用說明書

 

使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于*雙抗體夾心技術(shù)原理,來檢測人*多聚*(FPGS)),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

 

用    途: 用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中*多聚*(FPGS)的測定。

工作原理

本試劑盒采用的是*雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人*多聚*(FPGS)的水平。向預(yù)先包被了人*多聚*(FPGS)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入*多聚*(FPGS),溫育;溫育后,加入*標(biāo)記的抗FPGS抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人*多聚*(FPGS)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成

1

標(biāo)準品480ng/ml

0.5ml

7

顯色劑A

6ml

2

標(biāo)準品稀釋液

3ml

8

顯色劑B

6ml

3

酶標(biāo)包被板

12×8

9

終止液

6ml

4

鏈霉親和素-HRP

6ml

10

說明書

1

5

30倍濃縮洗滌液

20ml

11

封板膜

2

6

*標(biāo)記的抗-FPGS抗體

1ml

12

密封袋

1


需要而未提供的試劑和器材

1   37恒溫箱。

2   標(biāo)準規(guī)格酶標(biāo)儀。

3   精密移液器及一次性吸頭

4   蒸餾水,

5   一次性試管

6   吸水紙

注意事項

1   2-8取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2   各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。

3   嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準。

4   為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

5   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

6   底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

 

標(biāo)本要求

1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

1   標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋

240ng/ml

(5號標(biāo)準品

120μl的原倍標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液

120ng/ml

(4號標(biāo)準品

120μl5號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液

60ng/ml

(3號標(biāo)準品

120μl4號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液

30ng/ml

(2號標(biāo)準品

120μl3號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液

15ng/ml

(1號標(biāo)準品

120μl2號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液


2   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3   加樣:1)空白孔空白對照孔不加樣品,*標(biāo)記的抗FPGS抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準品孔:加入標(biāo)準品50μl*-HRP50μl(標(biāo)準品中已事先整合好*抗體,故不加3)待測樣品孔:加入樣本40μl,然后各加入- FPGS抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl,蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37溫育60分鐘。

4   配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5   洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6   顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色10分鐘。

7   終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。

8   測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD。測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

9.根據(jù)標(biāo)準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

操作程序總結(jié)

準備試劑,樣品和標(biāo)準品

 


 

加入準備好的樣品和標(biāo)準品,*標(biāo)記二抗和酶標(biāo)試劑,37反應(yīng)60分鐘

 

洗板5次,加入顯色液A、B,37顯色10分鐘

 

加入終止液

 

10分鐘之內(nèi)讀OD

 

計算

 

檢測范圍:1ng/ml400ng/ml

規(guī)格:    96T/

保存:    2-8

有效期:  6個月(2-8。

 

上海都宜生物科技有限公司作者

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