人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）說明書

【資料簡介】

人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）水平。用
純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入抗甲狀腺過氧化物酶
抗體（TPO-Ab），再與HRP 標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗
滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）呈正相關(guān)。用酶標儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體
（TPO-Ab）濃度。

人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）操作步驟
1.   標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
160mU/L  5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
80mU/L  4 號標準品  150µl 的5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
40mU/L  3 號標準品  150µl 的4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
20mU/L  2 號標準品  150µl 的3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
10mU/L  1 號標準品  150µl 的2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
 
 
2.   加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.   溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。  
7.   溫育：操作同 3。
8.   洗滌：操作同 5。
9.   顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。