大鼠腦紅蛋白（NGB）elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)
 

　　檢測(cè)原理
 

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人鈣衛(wèi)蛋白(Calprotectin)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人鈣衛(wèi)蛋白(Calprotectin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，計(jì)算樣品濃度。
 

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒樣品收集、處理及保存方法
 

　　.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心0分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
 

　　2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
 

　　3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心0分鐘去除顆粒和聚合物。
 

　　4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心0分鐘取上清。
 

　　5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 

　　自備物品
 

　　.     酶標(biāo)儀(450nm)
 

　　2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
 

　　3.     37℃恒溫箱
 

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒操作注意事項(xiàng)
 

　　.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
 

　　2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。
 

　　3.  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對(duì)照或者空白；預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋?zhuān)苯尤?μL加樣即可。
 

　　4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
 

　　5.  所有液體組分使用前充分搖勻。
 

　　試劑盒組成
 

　　名稱(chēng)96孔配置48孔配置備注
 

　　微孔酶標(biāo)板2孔×8條2孔×4條無(wú)
 

　　標(biāo)準(zhǔn)品(20μg/g)0.6mL0.6mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
 

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6mL3mL無(wú)
 

　　樣本稀釋液6mL3mL無(wú)
 

　　檢測(cè)抗體-HRP0mL5mL無(wú)
 

　　20×洗滌緩沖液25mL5mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
 

　　底物A6mL3mL無(wú)
 

　　底物B6mL3mL無(wú)
 

　　終止液6mL3mL無(wú)
 

　　封板膜2張2張無(wú)
 

　　說(shuō)明書(shū)份份無(wú)
 

　　自封袋個(gè)個(gè)無(wú)
 

　　注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：20、60、30、5、7.5、3.75 μg/g
 

　　試劑的準(zhǔn)備
 

　　20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按：20稀釋?zhuān)捶莸?0×洗滌緩沖液加9份的蒸餾水。
 

　　洗板方法
 

　　.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
 

　　2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡min，洗板5次。
 

　　大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa試劑盒操作步驟
 

　　.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
 

　　3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL；
 

　　4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體00μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 

　　6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育5min。
 

　　7.  每孔加入終止液50μL，5min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
 

　　結(jié)果判斷
 

　　繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。
 

　　試劑盒性能
 

　　.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
 

　　2.  靈敏度：檢測(cè)濃度小于.0μg/g。
 

　　3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
 

　　4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于5%。
 

　　5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
 

　　6.  有效期：6個(gè)月
 

　　免責(zé)聲明
 

　　.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
 

　　2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。