人腺苷脫氨酶（ADA）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

【資料簡(jiǎn)介】

                                            人腺苷脫氨酶(ADA)ELISA試劑盒說明書

實(shí)驗(yàn)原理
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被兔α2巨球蛋白(A2M)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的兔α2巨球蛋白(A2M)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。 
樣本處理要求
.血清：室溫血液自然凝固0-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合0-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到00萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能人上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
品優(yōu)勢(shì)
.  品種齊全、質(zhì)量可靠、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好。
2. 特異性強(qiáng)：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性好：板內(nèi)變異系數(shù)小于0% ，板間變異系數(shù)小于5% 。
4. 同城（上海）需要代測(cè)可免費(fèi)上門取樣，享送貨上門服。
5. 根據(jù)客戶需求專業(yè)定制elisa試劑盒并提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。
6. 臻科生物可提供專業(yè)技術(shù)服務(wù),全方為您解決實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中所遇到一切實(shí)驗(yàn)問題。
四、ELISA試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標(biāo)板
8孔×2條
8孔×6條
無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
無(wú)
樣本稀釋液
6mL
3mL
無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP
0mL
5mL
無(wú)
20×洗滌緩沖液
25mL
5mL
按說明書進(jìn)行稀釋
底物A
6mL
3mL
無(wú)
底物B
6mL
3mL
無(wú)
終止液
6mL
3mL
無(wú)
封板膜
2張
2張
無(wú)
說明書
份
份
無(wú)
自封袋
個(gè)
個(gè)
無(wú)
注意事項(xiàng)
. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
0. 實(shí)驗(yàn)還需要酶標(biāo)儀（450nm），37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL以及蒸餾水或去離子水。
. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份20×洗滌緩沖液加9份蒸餾水。
3. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
操作步驟
.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體00μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育5min。
7.每孔加入終止液50μL，5min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算 
以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。
八、關(guān)于兔α2巨球蛋白(A2M)定量ELISA試劑盒的特別說明
公司專業(yè)供應(yīng)各類科研產(chǎn)品，包括ELISA試劑盒、農(nóng)殘?jiān)噭┖?、放免試劑盒、生物試劑、檢測(cè)卡等優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。