ELISA的改進(jìn)新方法斑點ELISA（dot-ELISA）

【資料簡介】

Dot-ELISA是由Hawkes等建立。用吸附蛋白質(zhì)能力很強的硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將少量抗原（1～2μL）點加于膜上，干燥后經(jīng)過封閉液處理；滴加待檢血清和酶標(biāo)抗抗體（間接法），或是先在NC膜上滴加待檢血清（2～5tzL），干燥后加封閉液處理；滴加特異性抗原和酶標(biāo)抗體（雙抗體夾心法）進(jìn)行反應(yīng)。

洗滌后滴加能形成不溶性有色沉淀的底物溶液（HRP常用二氨基聯(lián)苯胺、4-氯乙萘酚）。陽性反應(yīng)在膜上出現(xiàn)肉眼可見的著色斑點。Dot-ELISA常用于篩選單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；在各種病毒性疾病和寄生蟲病的臨床診斷與血清流行病學(xué)調(diào)查中亦廣泛使用。

此法具有以下優(yōu)點：

①特異性強，假陽性較少；

②敏感性高，NC膜對蛋白質(zhì)的吸附性能優(yōu)于聚苯乙烯，可檢出lng抗腺病毒IgC；檢出抗原的敏感性較常規(guī)ELISA法高6～8倍；

③試劑用量少，比ELISA法至少節(jié)約10倍；

④操作簡便快速，不需要特殊設(shè)備條件，適合基層單位使用；

⑤抗原膜保存期長，—20％可保存半年，不影響其活性；并可郵寄供現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查使用；

⑥檢測結(jié)果可長期保存，便于復(fù)查。