小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3elisa試劑盒操作方法和結(jié)果計算與判斷

【資料簡介】

小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3elisa試劑盒  操作方法

1. 實驗前 20 分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫（20-25℃）；

2. 取出所需數(shù)量的板條，其余密封放回 4℃；

3. 建立標準曲線：設(shè)標準孔 8 孔，每孔中各加入樣品稀釋液 100ul，孔加標準品 100nl，混勻后用加樣器吸出 100ul，移至第二孔。如此反復(fù)對倍稀釋至第七孔，后，從第七孔中吸出 100ul 棄去，使之體積均為 100ul。第八孔為空白對照；

4. 加樣：待測品孔中每孔加入待測樣品 100ul；

5. 將反應(yīng)板置 37℃120 分鐘；

6. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干;

7. 每孔中加入抗體工作液 50ul;

8. 將反應(yīng)板充分混勻后置 37℃60 分鐘。

9. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干;

10. 每孔加酶標抗體工作液 100uL. 11. 將反應(yīng)板置 37℃60 分鐘。

12. 洗板：同前。

13. 每孔加入底物液 100uL，置 37℃暗處反應(yīng) 5-10 分鐘。

14. 每孔加入 50uL 終止液混勻。

15. 在 450nm 處測吸光值。（應(yīng)盡快，時間過長可能導(dǎo)致本底偏高）

結(jié)果計算與判斷：

1.所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再計算；

2.以標準品 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/ml 之 OD 值在半對數(shù)紙上作圖，畫出標準曲線，將濃度作為 X 軸（對數(shù)軸），OD 值作為 Y 軸（線性軸）。曲線應(yīng)為一光滑曲線。

3.根據(jù)樣品 OD 值在該曲線圖上查出相應(yīng)IGFBP7含量。