免疫金銀染色法

【資料簡介】

1、實驗原理

彩色免疫金銀染色法是抗原位點處生成的銀顆粒經(jīng)鐵氰化鉀與*的作用被氧化成溴化銀，后者與彩色顯影劑反應被還原成金屬銀，而彩色顯影劑本身則被氧化，其氧化產(chǎn)物使彩色還原劑由無色變?yōu)橛猩娜玖喜⒊练e在銀顆粒部位，金屬銀變成銀離子。

2、試劑及材料

Lugol’s碘液，含5%*和1%亞硫酸鈉溶液，2%鐵氰化鉀和1%*溶液。

3、操作方法

（1）石蠟切片常規(guī)脫蠟水合（細胞甩片、爬片或冰凍切片固定后用TBS洗）；

（2）依次與0.1%*，37℃，消化30min；Lugol’s碘液5min；5%*1min；TBS洗5min；

（1）加1%的卵蛋白，室溫15min ，TBS洗5min；加適當稀釋的一抗，置濕盒內(nèi)，4℃過夜；

（2）TBS洗三次，每次5min，加1%的卵蛋白，室溫15min；

（3）TBS洗5min，加適當稀釋的膠體金標記的二抗，置濕盒內(nèi)，4℃過夜；

（4）TBS洗三次，每次5min，再用蒸餾水洗后，將切片放入*顯色液，避光顯色5-10min；

（5）用蒸餾水沖洗，2%鐵氰化鉀和1%*作用1min；

（6）用蒸餾水沖洗，彩色顯色液顯影；

（7）用蒸餾水沖洗，依次與2%鐵氰化鉀和1%*作用1min；5%*和1%亞硫酸鈉作用5min，自來水沖洗，緩沖甘油封片；

4、結果觀察

鏡檢，抗原抗體反應處呈蘭色（a-萘酚）或綠色（菲尼酮）。

原文地址:/biotech/Immunity/2011/v81644278