免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞的脫水

【資料簡(jiǎn)介】

1、細(xì)胞脫水概述
組織經(jīng)固定和水洗后，會(huì)有大量的水分留在組織中，而水又不能與苯融合，因此必須在透明前脫去組織中的水分。用某些溶劑將組織中的水分置換出來(lái)的過(guò)程稱為脫水。對(duì)于不同的組織應(yīng)分開(kāi)脫水，特別是一些易脆的組織（如肝、脾等）應(yīng)嚴(yán)格掌握脫水時(shí)間，防止在*中停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。對(duì)于動(dòng)物組織，應(yīng)比人體標(biāo)本相應(yīng)縮短脫水時(shí)間。脫水應(yīng)按照從低濃度到高濃度的過(guò)程，否則標(biāo)本直接進(jìn)入高濃度溶液中極易引起組織的強(qiáng)烈收縮或使組織發(fā)生變形，從而影響切片，還會(huì)造成免疫組化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的脫片。
2、脫水劑的種類
（1）、乙醇：zui常用的脫水劑，脫水能力強(qiáng)，并能使組織硬化，與二甲苯能混合。其缺點(diǎn)是在高濃度乙醇，特別是無(wú)水乙醇中停留時(shí)間長(zhǎng)會(huì)引起組織收縮、變脆而影響后續(xù)的切片。尤其是應(yīng)用全自動(dòng)脫水機(jī)，因是加壓抽真空并加溫脫水，在高濃度乙醇中停留時(shí)間更不能太長(zhǎng)，應(yīng)經(jīng)試驗(yàn)摸索出適合自己?jiǎn)挝幻撍枰臅r(shí)間，不能盲目從書(shū)本上套用脫水時(shí)間。脫水時(shí)，應(yīng)從低濃度向高濃度梯度進(jìn)行。一般是人體組織從?5％乙醇開(kāi)始，對(duì)于小動(dòng)物、胚胎及柔軟的組織可從30％乙醇開(kāi)始脫水。只有脫水充分，才能在透明劑中透明。若是人工脫水，必須在加蓋的容器內(nèi)進(jìn)行，尤其是高濃度乙醇很易吸收空氣中的水分，陰雨天更應(yīng)注意。在透明前將組織取出，用濾紙吸干后再透明。
（2）、丙酮：脫水作用比乙醇強(qiáng)，但對(duì)組織的收縮也大，毒性強(qiáng)，價(jià)格高，因此一般不用于常規(guī)組織的脫水，主要用于快速脫水及固定兼脫水。此時(shí)應(yīng)注意個(gè)人防護(hù)，在帶有抽風(fēng)功能的裝置中進(jìn)行，脫水時(shí)間1～3h左右。丙酮還可作為染色后的脫水劑，用于甲基綠—派洛寧顯示DNA及RNA。
（3）、正丁醇：為五色液體，微溶于水，在100ml水中只能溶解8．3g，故脫水能力較弱，但能與水、乙醇及石蠟混合，因此經(jīng)正丁醇脫水的組織可直接浸蠟。它的優(yōu)點(diǎn)是很少引起組織的收縮及變脆。一般用法為：組織經(jīng)固定及沖洗后，依次人50％、70％、80％乙醇中脫水，然后人正丁醇，12～24h后浸蠟。使用時(shí)也應(yīng)注意防護(hù)。http://www.hg1112.cn/Login/default?Stand_DownLoadOperate
（4）、叔丁醇：異丁醇的一種，可與水、乙醇、二甲苯混合，可以單用或與乙醇混合使用，是一種使用較廣的脫水劑，它不會(huì)使組織收縮或變硬，不必經(jīng)過(guò)透明而直接浸蠟。電鏡上為常用的中間脫水劑。
（5）、環(huán)己酮：沸點(diǎn)為140~C，冰點(diǎn)為一40~C，密度與水相似，無(wú)毒，可與苯、二甲苯、氯仿等有機(jī)溶劑混合，也是石蠟溶劑，可代替純乙醇脫水后直接浸蠟，組織不會(huì)變硬，不需經(jīng)二甲苯透明。
（6）、松脂醇：組織固定后按常規(guī)經(jīng)各濃度乙醇至95％乙醇中，按下列順序進(jìn)行脫水和透明處理：
①、浸入等份95％乙醇和松脂醇的混合液中，待組織塊下沉后轉(zhuǎn)入下步處理；
②、95％乙醇1份加松脂醇2份的混合液中浸泡1h；
③、95％乙醇1份加松脂醇3份的混合液中浸泡1h；http://www.hg1112.cn/Login/default?Stand_DownLoadOperate
④、松脂醇I、Ⅱ、Ⅲ中各浸泡1h；⑤松脂醇5份加石蠟1份的混合液中浸泡lh，然后浸蠟包埋。多用于經(jīng)乙醇或Carnoy液固定的組織。經(jīng)松脂醇處理的組織收縮較小，發(fā)生硬化也少。