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常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)有兩大類

時間:2013-12-24閱讀:334
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常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類

一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(*轉(zhuǎn)染).前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析.一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測.后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在.盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高.外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉(zhuǎn)染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;*抗性基因),潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系.

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