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DAPI染色

時(shí)間：2013-7-1閱讀：2512
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 DAPI染色原理：

DAPI 為一種熒光染料，可以穿透細(xì)胞膜與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合而發(fā)揮標(biāo)記的作用，可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光，和EB相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。顯微鏡下可以看到顯藍(lán)色熒光的細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞標(biāo)記的效率高（幾乎為100 %） ，且對(duì)活細(xì)胞無毒副作用。DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。細(xì)胞經(jīng)熱激處理后用DAPI染色3分鐘，在熒光顯微鏡下可以看到到細(xì)胞核的形態(tài)變化。

a、 正常的煙草細(xì)胞核：核形完整，染色質(zhì)均勻。

b、染色質(zhì)固縮，向外周聚集，形成周邊化。

c、 染色質(zhì)進(jìn)一步固縮，形成很多顆粒物質(zhì)。

d、 細(xì)胞核破裂形成碎片，核解體。

染色步驟
在細(xì)胞移植前，將DAPI 以一定的濃度加入培養(yǎng)基中，與細(xì)胞共同孵育過夜，用PBS 緩沖液漂洗至少6 次以洗掉未結(jié)合的DAPI，在用酶消化后離心收集細(xì)胞，加入DMEM 培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液以備用。
存儲(chǔ)條件：-20℃避光保存
每次使用，用量較少，可反復(fù)凍融，無需分裝
注意事項(xiàng)：
1、DAPI強(qiáng)烈致癌，操作時(shí)要戴上手套。

2、貯存液用70%酒精配制，濃度100 µg/ml，可用黑紙包住，長期凍存。使用液按1:1000用PBS稀釋，zui終濃度100 ng/ml。

3、DAPI是非常的DNA染料，固定過和沒有固定過的活細(xì)胞均可用。

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