試劑 盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中 補(bǔ)體3a（C3a） 含量。
實(shí)驗(yàn)原理 ：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定 標(biāo)本 中 小鼠 補(bǔ)體3a （ C3a ） 水平。用純化的 小鼠 C3a 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 補(bǔ)體3a （ C3a ）， 再與HRP 標(biāo)記的 C3a 抗體結(jié)合，形成抗體- 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物 ，經(jīng)過(guò)*洗滌后 加 底物TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 C3a 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD 值）， 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 計(jì)算樣品 中小鼠 補(bǔ)體3a （ C3a ） 濃度。
試劑盒組成 ：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（ 48 ） | 2片（ 96 ） | |
密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | |
酶標(biāo)包被板 | 1 ×48 | 1 ×96 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品： 180 μ g/ml | 0.5ml× 1 瓶 | 0.5ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml× 1 瓶 | 1.5ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A 液 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B 液 | 3 ml× 1 瓶 | 6 ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml× 1 瓶 | 6ml× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | （20ml × 20 倍）× 1 瓶 | （20ml × 30 倍）× 1 瓶 | 2-8℃保存 |
樣本處理及要求 ：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬(wàn) /ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8 ℃的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可 將標(biāo)本放于 -20 ℃保存，但 應(yīng) 避免反復(fù)凍融 .
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品 ，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（ HRP ）活性。
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