科研ELISA試劑盒法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，可概括四個(gè)方面： 、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。 2、研究抗酶抗體的合成。 3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。 4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。

基本方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為～0μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.ml，4℃過一夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.ml。37℃孵育0.5～小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則40nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.倍，即為陽性。

基本方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至～0μg／ml，每孔加0.ml，4℃過一夜。次日洗滌3次。
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加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）
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于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。
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其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。