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免疫測(cè)定中的干擾機(jī)制

時(shí)間:2015/11/20閱讀:823
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    HA 的產(chǎn)生機(jī)制至今還不能闡明,目前所使用的免 疫試劑抗體大多源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,因此,體內(nèi)含HA 的患者在做血清免疫檢測(cè)時(shí),HA 可與試劑抗體結(jié)合而導(dǎo)致干擾。HA 通常與試劑抗體的Fc 區(qū)表位或者F(ab’)2 區(qū)域的決定簇結(jié)合。目前*的HA 在免疫測(cè)定中的干擾機(jī)制主要發(fā)生在夾心免疫測(cè)定法和競(jìng)爭(zhēng)免疫測(cè)定法中。  

HA在夾心免疫測(cè)定法中的干擾機(jī)制

    ELISA夾心法測(cè)定中,HA與試劑抗體(捕獲抗體和標(biāo)記抗體)的結(jié)合,可通過(guò)Fc-Fc 和Fab-Fab兩種結(jié)合方式干擾測(cè)定。正常情況下,在ELISA 夾心法中,待測(cè)抗原同時(shí)與捕獲抗體和標(biāo)記抗體結(jié)合,形成了固相捕獲抗體-待測(cè)抗原-標(biāo)記抗體的復(fù)合物。在以Fc-Fc 的方式結(jié)合的機(jī)制中,HA的Fc 端結(jié)合到捕獲抗體的Fc 段上,而HA的Fab 區(qū)域則結(jié)合到標(biāo)記抗體的Fab 區(qū)域上,導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。在以Fab-Fab 結(jié)合方式的機(jī)制可引起假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果,如HA的Fab區(qū)域通過(guò)分別結(jié)合捕獲抗體的Fab區(qū)域和標(biāo)記抗體的Fab 區(qū)域,阻擋捕獲抗體和標(biāo)記抗體與待測(cè)抗原的結(jié)合,從而導(dǎo)致假陰性;HA的F(ab’)2 通過(guò)同時(shí)結(jié)合捕獲抗體的Fab區(qū)域和標(biāo)記抗體的Fab區(qū)域,形成固相捕獲抗體-HA-標(biāo)記抗體復(fù)合物,如果標(biāo)本中無(wú)待測(cè)抗原,HA就引起假陽(yáng)性的結(jié)果。

HA在競(jìng)爭(zhēng)免疫測(cè)定法中的干擾機(jī)制

    在免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定中,HA干擾也可造成假陽(yáng)性或假陰性。在正常的競(jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)中,待測(cè)抗原與標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)合到連接在載體上的捕獲抗體,形成正常的反應(yīng)復(fù)合物。但是如果反應(yīng)體系中存在HA,測(cè)定結(jié)果將可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性的現(xiàn)象。造成假陰性結(jié)果的機(jī)制:HA通過(guò)同時(shí)結(jié)合捕獲抗體和標(biāo)記抗原,形成異常的反應(yīng)復(fù)合物,干擾捕獲抗體結(jié)合檢測(cè)抗原,消耗可結(jié)合待測(cè)抗原的捕獲抗體,從而導(dǎo)致假陰性。造成假陽(yáng)性結(jié)果的機(jī)制:HA直接結(jié)合捕獲抗體與抗原結(jié)合的部位,形成異常的復(fù)合物,占據(jù)捕獲抗體結(jié)合待測(cè)抗原或標(biāo)記抗原的結(jié)合空間,消耗可結(jié)合待測(cè)抗原或標(biāo)記抗原的捕獲抗體,導(dǎo)致假陽(yáng)性。

3-位點(diǎn)免疫檢測(cè)法中的干擾機(jī)制

    該干擾存在于肌鈣蛋白I的免疫檢測(cè)中。所謂的3-位點(diǎn)是試劑盒中含有針對(duì)肌鈣蛋白I分子上3個(gè)不同抗原決定簇的3種抗體,肌鈣蛋白I可以同時(shí)結(jié)合2個(gè)捕獲抗體與個(gè)示蹤抗體或者個(gè)捕獲抗體與2個(gè)示蹤抗體,使特異性和靈敏度大大提高,后者可使反應(yīng)的靈敏度進(jìn)一步增高。由于肌鈣蛋白I 3-位點(diǎn)免疫測(cè)定增加了一種捕獲抗體或者標(biāo)記抗體,這也同時(shí)提高了捕獲抗體或者標(biāo)記抗體與HA結(jié)合的機(jī)率,從而導(dǎo)致肌鈣蛋白I 3-位點(diǎn)免疫測(cè)定比肌鈣蛋白I 雙位點(diǎn)免疫測(cè)定更加容易受到HA的干擾,結(jié)合的部位與上述兩種機(jī)制相似。


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