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細胞外囊泡的檢測方法

時間:2015/10/19閱讀:2195
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    細胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EVs)是指從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,直徑從40nm到000nm不等。胞外囊泡主要由微囊泡(Microvesicles,  MVs)和外泌體(Exosomes, Exs)組成,微囊泡是細胞激活、損傷或凋亡后從細胞膜脫落的小囊泡,直徑約為00nm – 000nm;

    外泌體由細胞內(nèi)的多泡小體(multivesicular bodies)與細胞膜融合后以外分泌的形式釋放到細胞外,直徑約為40nm - 00nm。細胞外囊泡廣泛存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液(血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁)中,攜帶有細胞來源相關(guān)的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA、mRNA、miRNA等,參與細胞間通訊、細胞遷移、血管新生和免疫調(diào)節(jié)等過程。在糖尿病、心血管疾病、艾滋病、慢性炎癥疾病以及癌癥中都發(fā)現(xiàn)細胞外囊泡水平的升高,它們很有可能成為這類疾病的診斷標志物,因此,對細胞外囊泡進行準確的定性和定量研究顯得尤為重要。
 
細胞外囊泡的檢測方法

    目前細胞外囊泡(EVs)的檢測方法主要有掃描電子顯微鏡、原子力顯微鏡、動態(tài)光散射技術(shù)、納米微粒追蹤分析術(shù)(NTA)、流式細胞儀和ELISA等,由于通量高、用時短、操作簡單,ELISA和流式細胞儀是比較常用的方法。ELISA方法容易受其他可溶性抗原的干擾,而且無法知道囊泡的大小、數(shù)量等信息;流式細胞儀不僅可以檢測囊泡的大小、數(shù)量,而且通過細胞特異的標記物染色可以檢測囊泡的來源,將囊泡進行分類,因此,流式細胞儀理論上是進行囊泡快速、高通量、多參數(shù)檢測的*選擇。然而,傳統(tǒng)流式細胞儀針對的樣本主要是細胞,散射光的檢測極限通常是300-500nm,而大多數(shù)細胞外囊泡的直徑都在300nm以下,由于無法與背景噪音區(qū)分,直徑小于300nm的細胞外囊泡很難被檢測到,因此,囊泡數(shù)量往往被低估,檢測結(jié)果自然也不準確。

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