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關(guān)于細(xì)胞傳代時消化的問題

時間:2017-5-12閱讀:2293
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可以這樣說,對于需要消化傳代的細(xì)胞,每一次的消化都是對這個細(xì)胞存活與否,狀態(tài)好與不好zui至關(guān)重要的考驗。

很多同學(xué)都遇到過這個問題,自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了,狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以,越長越差。

在消化的過程中,你加入*后,所有細(xì)胞都在被*消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細(xì)胞消化同樣的時間對細(xì)胞是不平的,他們受到了差別待遇當(dāng)然會有脾氣啊。。。呵呵。大家爭取爭取做到因材施教,比如試試下面的“四步消化法”。(以難消化細(xì)胞為例)

具體操作

1).首先不加*,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍(目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉)。

2).然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面*消化過的細(xì)胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細(xì)胞對*的敏感度了。)

3).吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的*潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的*消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時候立即吸掉*與干凈彈頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比。)

4).然后把前面剛吸出來的*重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的*,如果你們那比較富裕的話,呵呵。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細(xì)胞間隙明顯,細(xì)胞獨立開來的時候,吸掉*,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(據(jù)實際情況把握)。

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