無機(jī)磷檢測試劑盒(紫外分光光度比色法) 簡介

血清中的無機(jī)磷(Inorganic phosphorous)主要由H2PO4-和HPO42-兩種磷酸根陰離子 組成，上述陰離子在在丌同的 pH 環(huán)境下能快速相互轉(zhuǎn)換。在 pH7.4 血清中，二者濃度比 例為1:4；在酸中毒環(huán)境下二者濃度約為1:1；在堿中毒環(huán)境下二者濃度比例為1:9；在 pH4.5 尿液中濃度比例為 100:1。WHO*的常規(guī)檢測方法為比色法，我國衛(wèi)生部臨檢中心* 的常規(guī)方法為*鉬藍(lán)比色法和米吐爾鉬藍(lán)比色法，亦可采用紫外分光光度法。           

無機(jī)磷檢測試劑盒(紫外分光光度比色法)無需處理樣本，利用無機(jī)磷不鉬酸銨 結(jié)合生成磷鉬酸銨，通過分光光度計直接檢測 325～340nm 處吸光度，根據(jù)公式計算出無 機(jī)磷含量。紫外分光光度法優(yōu)點(diǎn)在于：操作簡單、快速、穩(wěn)定；缺點(diǎn)在于：易受溶血、黃疸、 脂血的干擾。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，丌宜用于臨床診斷戒其他用途。  

操作步驟(僅供參考)：

 1、 (選做)制備樣品：

① 漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃ 凍存，用于 Pi 的檢測。

②細(xì)胞戒組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞戒組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于 Pi 的檢測。

試劑(A): 磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) 1ml 4℃  

試劑(B): 磷標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 2ml RT   

試劑(C): Pi Assay buffer  100ml RT  

試劑(D): 鉬酸銨顯色液 100ml 4℃ 避光

試劑(E): ddH2O 2ml RT

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ƒ高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的 Pi，可以使用 ddH2O稀釋，丌宜使用普通蒸 餾水稀釋。   ④(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計     算單位蛋白重量組織戒細(xì)胞內(nèi)的 Pi 含量。 2、 制備磷標(biāo)準(zhǔn)工作液：取適量的磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)：磷標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1： 24 的比例稀釋，即獲得磷標(biāo)準(zhǔn)(1.292mmol/L)。4℃保存，用于 Pi 的檢測。 3、 制備 Pi 顯色工作液：取適量的Pi Assay buffer 和鉬酸銨顯色液，等量混合，24h 內(nèi)使 用。 4、 Pi 檢測：按下表操作。       

5、 混勻，室溫靜置 5min，分光光度計 340nm 處檢測，比色杯光徑 1.0cm，以空白管調(diào) 零，讀取各管吸光度值。一般應(yīng) 2h 內(nèi)檢測完畢。  

計算：血清、血漿中無機(jī)磷計算公式：磷(mmol/L)=( A 測定/ A 標(biāo)準(zhǔn))×1.292      

尿液中無機(jī)磷計算公式：磷(mmol/d)=( A 測定/ A 標(biāo)準(zhǔn))×1.292×N×24h 尿量(L)      

組織中磷計算公式：磷(mmol/mg)=( A 測定/ A 標(biāo)準(zhǔn))×1.292/待測樣品蛋白濃度(mg/L) 式中： A 測定=待測管的吸光度值  A 標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度值  N=尿液稀釋倍數(shù) 單位換算：mg/dl=mmol/L/0.323

健康成年人血清磷濃度：0.9～1.34mmol/L(2.76～4.16mg/dl)  

1、 本法應(yīng)在 5min～2h 內(nèi)檢測。3h 后標(biāo)準(zhǔn)管吸光度無變化，測定管吸光度隨著時間的延 長而上升。

2、 溶血樣本對檢測有干擾，盡量避免采用溶血樣本。

3、 黃疸和脂血樣本應(yīng)做標(biāo)本空白。

加入物( ml) 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測定管 ddH2O 0.07 — — 磷標(biāo)準(zhǔn)工作液(1.292mmol/L) — 0.07 — 待測樣品  — 0.07 Pi 顯色工作液 2.0 2.0 2.0

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4、 本法能夠用于自動生化分析儀終點(diǎn)檢測法。

5、 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)

6、 本法線性范圍為 0.33～3.88mmol/L。  

有效期： 12 個月有效。