胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是一種嚴(yán)重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的重要病原菌,至少有15種血清型,根據(jù)所有血清型菌株僅在感染豬體內(nèi)產(chǎn)生外毒素ApxⅣ的特點,建立了一種能夠區(qū)分感染豬與免疫豬的鑒別診斷方法ApxⅣ-ELISA。研究在反應(yīng)條件方面加以優(yōu)化,將該診斷方法進(jìn)一步研制成試劑盒,對其特異性、敏感性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行了測試,與間接血凝試驗及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒進(jìn)行了對比研究,并用該試劑盒檢測了來自中國、英國、丹麥、美國、加拿大、澳大利亞等國的臨床豬血清1453份。

      結(jié)果表明,ApxⅣ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性,與CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒的檢測符合率為91.37%;3批試劑盒的批內(nèi)和批間重復(fù)性良好(變異系數(shù)均<15%);試劑盒在2～8℃保存9個月內(nèi)穩(wěn)定性良好。所檢種豬血樣中,來自中國豬場1、中國豬場2、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的ApxⅣ抗體陽性率分別為30.05%、70.69%、39.72%、0.64%、42.22%、1.85%和93.94%;所檢我國2個規(guī)模化豬場的仔豬ApxIV抗體陽性率分別為21.77%和27.15%,育肥豬的陽性率分別為5.51%和11.07%。研究表明,ApxⅣ-ELISA試劑盒能夠有效區(qū)分APP感染豬與三價滅活疫苗或亞單位疫苗免疫豬。