豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS），是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome Virus，PRRSV）引起的以母豬繁殖障礙及仔豬呼吸道疾病為特征的高度接觸性傳染病。本病自1987年報(bào)道以來(lái)，給養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，我國(guó)也于1995年暴發(fā)PRRS。自2001年以來(lái)，我國(guó)許多地區(qū)爆發(fā)流行了一種原因不明的豬“高熱病"，之后一系列的研究證明，引起“高熱病"的主要病原為變異的高致病性的PRRSV，故將此病命名為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（Highly pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，HP-PRRS）。

     與PRRSV相比，HP-PRRSV在Nsp2基因編碼區(qū)的第1447~1449位和1597~1698位發(fā)生突變，即在Nsp2蛋白序列中第483位和535-563位有30個(gè)氨基酸的缺失，這一點(diǎn)成為鑒別二者的重要指標(biāo)，通過(guò)檢測(cè)非結(jié)構(gòu)蛋白抗體可區(qū)分由PRRSV與HP-PRRSV引起的感染，為臨床診斷提供輔助依據(jù)。實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)PRRS感染的方法主要包括病毒分離、回歸本動(dòng)物、過(guò)氧化物酶單層試驗(yàn)(IPMA)、血清中和實(shí)驗(yàn)(SN)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELlSA)、RT-PCR等，這些仍然是監(jiān)測(cè)PRRS并輔助檢測(cè)的重要方法，但現(xiàn)有的診斷方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適用于快速臨床檢測(cè)或大量檢測(cè)，而且能快速區(qū)分PRRS和HP-PRRS的診斷方法尚少，因此研制出簡(jiǎn)便、特異并快速的診斷方法十分必要。我國(guó)目前應(yīng)用的PRRS疫苗主要是滅活疫苗和弱毒疫苗，但在種豬場(chǎng)中只能利用滅活疫苗，以避免毒力返強(qiáng)、傳毒、散毒以及垂直感染。

     因此，建立一種可區(qū)分野毒感染和疫苗免疫抗體性質(zhì)的快速現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用的診斷方法勢(shì)在必行，為臨床綜合防控HP-PRRS、種豬凈化以及分子流行病學(xué)調(diào)查提供技術(shù)方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)合成HP-PRRSV在Nsp2蛋白中缺失的30個(gè)氨基酸的多肽，并應(yīng)用該多肽制備相應(yīng)的單克隆抗體（簡(jiǎn)稱為缺失段Nsp2單抗）1E9，并應(yīng)用1E9單克隆抗體研制了可用于快速、特異區(qū)分PRRSV感染和HP-PRRSV感染的液相阻斷ELISA試劑盒及免疫膠體金診斷試紙條。本實(shí)驗(yàn)中的液相阻斷ELISA方法在檢測(cè)過(guò)程中對(duì)HP-PRRSV、CSFV、PPV、PRV、SI抗血清均無(wú)交叉反應(yīng)，該方法可檢測(cè)的陽(yáng)性血清zui高稀釋度為1:20。

     應(yīng)用液相阻斷ELISA試劑盒對(duì)220份本地血清樣品及對(duì)應(yīng)病料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)陽(yáng)性率為53.2%，商品化ELISA試劑盒檢測(cè)陽(yáng)性率為69.5%；而由商品化ELISA試劑盒檢測(cè)為陰性的樣品，液相阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果亦為陰性；兩試劑盒的差異樣品數(shù)共36份，經(jīng)RT-PCR鑒定其中的11份樣品為HP-PRRSV感染豬血清，而其余25份樣品為經(jīng)過(guò)PRRSV滅活疫苗免疫豬血清。

     本實(shí)驗(yàn)中的膠體金診斷試紙條在檢測(cè)過(guò)程中對(duì)HP-PRRSV、CSFV、PPV、PRV、SI抗血清均無(wú)交叉反應(yīng)，該方法可檢測(cè)的陽(yáng)性血清zui高稀釋度為1:10。應(yīng)用膠體金診斷試紙條對(duì)100份血清樣品及對(duì)應(yīng)病料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示膠體金診斷試紙條與商品化ELISA試劑盒共同陽(yáng)性樣品數(shù)為59，共同陰性樣品數(shù)為35，免疫膠體金診斷試紙條檢測(cè)為陰性而試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品數(shù)為6。本課題所研制的液相阻斷ELISA方法對(duì)該100份樣品的檢測(cè)結(jié)果與該試紙條的檢測(cè)結(jié)果相符。通過(guò)臨床對(duì)本地血清樣品的檢測(cè)，結(jié)果顯示兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果基本可信，可推廣應(yīng)用于種豬場(chǎng)定期的血清學(xué)監(jiān)測(cè)、及時(shí)排除陽(yáng)性（即PRRSV感染或注射活毒疫苗）種豬，剔除帶毒豬，防止疫源地?cái)U(kuò)大，并及時(shí)采用有效防治措施。