Western及IP細(xì)胞裂解液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø         Western及IP細(xì)胞裂解液（Cell lysis buffer for Western and IP），是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本細(xì)胞裂解液裂解的細(xì)胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀（immunol precipitation，IP）和免疫共沉淀（co-IP）。

Ø         Western及IP細(xì)胞裂解液的主要成分為20mM Tris （pH7.5），150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，βglycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。

Ø         用Western及IP細(xì)胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用森貝伽生物的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S）測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

包裝清單：

保存條件：

-20℃保存，一年有效。

注意事項(xiàng)：

Ø         為取得*的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。

Ø         需自備PMSF。PMSF（ST506）可以向江萊訂購(gòu)。

Ø         裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

Ø         為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：

對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1.         融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

2.         對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。

3.         充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入100微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150微升或200微升。

對(duì)于組織樣品：

1.         把*切成細(xì)小的碎片。

2.         融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。

3.         按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。）

4.         用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5.         充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6.         如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

附：森貝伽生物的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異和選擇

 首先請(qǐng)參考下表，了解各種裂解液的主要特點(diǎn)和差異。

Ø         用于普通的Western、IP或co-IP，我們推薦使用Western及IP細(xì)胞裂解液（P0013），該裂解液已被國(guó)內(nèi)各大研究機(jī)構(gòu)廣泛使用，用戶普遍反映很好。裂解細(xì)胞或組織后，沒(méi)有非常粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測(cè)。 

Ø         對(duì)于某些特殊蛋白的IP，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液（P0013）效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液（強(qiáng)、中或弱）或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時(shí)候背景很高，即非特異的蛋白也被IP下來(lái)，則需要選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液，例如RIPA裂解液（強(qiáng)或中）。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無(wú)法被IP下來(lái)，則說(shuō)明裂解液的強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液（弱）或NP-40裂解液。

Ø         對(duì)于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液（P0013）效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液例如RIPA裂解液（強(qiáng)、中）或SDS裂解液。