細(xì)胞培養(yǎng)中無(wú)菌操作技術(shù)

上海隆壘分享細(xì)胞培養(yǎng)中的無(wú)菌技術(shù)：

        1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)（laminar flow） 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

        2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺(tái)面的*無(wú)菌區(qū)域，勿在邊緣的非無(wú)菌區(qū)域操作。

        3. 小心取用無(wú)菌的實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，亦不要在打開(kāi)的容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

        4. 工作人員應(yīng)注意自身的安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)（至少Class II）。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol 的產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭的傷害等。

        5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2 鋼瓶的CO2 壓力

5.2. CO2 培養(yǎng)箱的CO2 濃度、溫度、及水盤(pán)是否有污染（水盤(pán)的水用無(wú)菌水，每周更換）。

5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA）。

        6. 水槽可添加消毒劑（Zephrin 1:750），定期更換水槽的水。

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