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技術(shù)文章
正?；ぜ?xì)胞原代培養(yǎng)
點(diǎn)擊次數(shù)：1121 發(fā)布時(shí)間：2012-11-29
正?；ぜ?xì)胞原代培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、兔，人手術(shù)切除的關(guān)節(jié)等；
2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg 2+ 的1×PBS，添加100IU/ml*、100μg/ml*，pH7.2；
3. 培養(yǎng)液：RPMI1640培養(yǎng)基，補(bǔ)加15%小牛血清；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 將大鼠處死后，用75%酒精消毒；
2. 用*剖開(kāi)其四肢皮膚與肌肉，暴露長(zhǎng)骨兩端的關(guān)節(jié)，取出關(guān)節(jié)面滑膜組織置于盛有緩沖液的培養(yǎng)皿中；
3. 剔除滑膜組織外層結(jié)構(gòu)及周邊軟骨組織，用緩沖液洗2—3次；
4. 將滑膜組織置于盛有少量小牛血清的培養(yǎng)皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植塊；
5. 將制備的植塊接種到螺旋口培養(yǎng)瓶中。反轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使植有組織塊的一面朝上，加入培養(yǎng)液，蓋好瓶蓋。將培養(yǎng)瓶放入含5%CO2的培養(yǎng)箱中在37℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)；
6. 培養(yǎng)4h后，組織塊較牢黏附于瓶底時(shí)，再輕輕反轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，繼續(xù)培養(yǎng)；
7. 培養(yǎng)3d后換培養(yǎng)液。