實(shí)驗(yàn)原理
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中的中藥成份之一。在培養(yǎng)基中加入適量血清（10%），首先可以補(bǔ)充細(xì)胞生長(zhǎng)所需的生長(zhǎng)因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性；再次，它還能中止的作用，并保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷等。但是血清成分復(fù)雜，不同來(lái)源、不同批號(hào)生產(chǎn)的血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)作用的差異較大。血清的保存期只有一年，不同存放時(shí)期的血清的效力也不同。所以，當(dāng)新購(gòu)得的血清或要在開(kāi)始一個(gè)重大試驗(yàn)的時(shí)候，應(yīng)首行牛血清的篩選。
篩選時(shí)，通常選用正常的二倍體細(xì)胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，也可以使正要準(zhǔn)備培養(yǎng)的細(xì)胞。另外，用已知血清作對(duì)照。
儀器、材料和試劑
儀器
CO2 培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)，微量加樣器，滅菌鍋
材料
96孔培養(yǎng)板，刻度吸管，移液管，試管，吸管，廢液缸，血球計(jì)數(shù)板，HeLa細(xì)胞，Mel細(xì)胞
試劑
DMEM，不同批號(hào)的血清，，雙抗
實(shí)驗(yàn)步驟
1.取HeLa細(xì)胞和Mel細(xì)胞（本來(lái)應(yīng)該取正常的二倍體細(xì)胞和不太好養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，但是實(shí)驗(yàn)室條件有限，本組做HeLa細(xì)胞），消化后，用無(wú)血清培養(yǎng)基（事先加雙抗）吹打成細(xì)胞懸液（避免以前血清的干擾）。計(jì)數(shù)。
2.取4000個(gè)左右的HeLa細(xì)胞加入到每行的*孔（在加之前要震蕩培養(yǎng)基）。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)計(jì)數(shù)后應(yīng)加11μL細(xì)胞。
3.在A和H行中*孔加入89μL含標(biāo)準(zhǔn)血清(2004.12)的培養(yǎng)基。（對(duì)照組）
4.在A和H行中每一孔中加入100μL含標(biāo)準(zhǔn)血清的培養(yǎng)基。
5.將*孔中的液體吸100μL至第二孔，從第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。zui后的100μL棄掉。這樣就形成了從*個(gè)孔到zui后一個(gè)孔的細(xì)胞梯度從大約2056，1028等至1個(gè)。（要吹細(xì)均勻）
6.每個(gè)孔再補(bǔ)加100μL含標(biāo)準(zhǔn)血清的培養(yǎng)基。這可以保證孔中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
7.在B行采取同樣的方法。不同的是用含有需篩選的批號(hào)為011217血清代替標(biāo)準(zhǔn)血清。
8.在C至G行采用同樣的方法。血清批號(hào)分別是030224，040528，040830，041012，041016。
9.將96孔培養(yǎng)板放入CO2 培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)一周。
10. 培養(yǎng)結(jié)束后，觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)的情況。比較在同一細(xì)胞濃度下的不同學(xué)清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。在同一細(xì)胞濃度下細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)zui多的培養(yǎng)基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
從第五行開(kāi)始計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)下表
集落數(shù)第5行
第6行
第7行
第8行
第9行
第10行
第11行
第12行
A
00
00
00
00
00
00
00
00
B
22
12
03
03
01
00
00
00
C
42
17
04
05
01
01
02
00
D
15
04
04
00
00
00
00
00
E
14
07
00
03
02
00
01
00
F
25
10
09
03
00
00
00
00
G
24
15
00
01
00
00
00
00
H
00
00
00
00
00
00
00
00
實(shí)驗(yàn)中，我們可以看出C組細(xì)胞的集落數(shù)是zui多的（相對(duì)于同一列的來(lái)說(shuō)）。C組細(xì)胞是用批號(hào)為030224的血清來(lái)培養(yǎng)的，這說(shuō)明030224號(hào)血清更能促進(jìn)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)。在別的同學(xué)所作的實(shí)驗(yàn)中，是E組的Mel細(xì)胞生長(zhǎng)的，這說(shuō)明040830更能促進(jìn)Mel細(xì)胞的生長(zhǎng)。由此看出，不同細(xì)胞是適應(yīng)不同的血清的，不能一概而論。A組和H組是對(duì)照組，但并沒(méi)有長(zhǎng)出細(xì)胞集落。這個(gè)情況在全班中普遍存在，這可能是對(duì)照組血清有問(wèn)題或者做實(shí)驗(yàn)時(shí)根本沒(méi)有加血清。
實(shí)驗(yàn)討論
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中重要的培養(yǎng)成份之一，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有廣泛影響。在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，我們通常會(huì)加入10%的血清。血清的質(zhì)量對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要。一般說(shuō)來(lái)，牛血清包括以下成分：生長(zhǎng)因子（如激素，白細(xì)胞介素等），他們可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)；貼附因子，他們可以促進(jìn)細(xì)胞的貼壁，往往只有細(xì)胞貼壁才能增值（懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞除外）；蛋白質(zhì)（如血清白蛋白，球蛋白等），既可以作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，又可以中止的作用；還有很多成分不明的物質(zhì)。血清還可以起到解毒作用，如脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性。血清還可以是細(xì)胞免受機(jī)械損傷。
不同廠(chǎng)家，不同批次生產(chǎn)的血清質(zhì)量不同，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用不同，所以在拿到一個(gè)新血清或者開(kāi)始重大科研實(shí)驗(yàn)時(shí)，要進(jìn)行新生牛血清的篩選。有些血清可能有支原體污染；不同血清對(duì)不同細(xì)胞的促進(jìn)作用不同；血清放置一段時(shí)間后，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值會(huì)降低，所以有必要進(jìn)行新生牛血清的篩選。新生牛血清zui適宜被試細(xì)胞生長(zhǎng)的血清可以用于的實(shí)驗(yàn)。
本實(shí)驗(yàn)中是一次加上所有的細(xì)胞的。這樣使得每一排的細(xì)胞總數(shù)的差異減到zui小，從而使得系統(tǒng)誤差減?。欢?，這種方法方便快捷，效率也有所提高；試驗(yàn)結(jié)果顯示，我們的這種方法卻是較為*。
