【原理】
補(bǔ)體能使溶血素（抗綿羊紅細(xì)胞抗體）致敏的綿羊紅細(xì)胞（SRBC）發(fā)生溶血，當(dāng)致敏的綿羊紅細(xì)胞濃度恒定時(shí)，溶血程度與補(bǔ)體含量和活性呈正比例關(guān)系。因此，將新鮮待檢血清做不同稀釋后，與致敏紅細(xì)胞反應(yīng)，測定溶血程度，以50%溶血時(shí)的zui小血清量判定終點(diǎn)，可測知補(bǔ)體總?cè)苎钚浴Ｒ?0%溶血判斷結(jié)果比溶血靈敏、準(zhǔn)確。
【材料】
1.待檢人血清：靜脈抽血，待凝后立即分離血清進(jìn)行測定或-70℃保存。
2.緩沖鹽水（pH7.4）：取NaCl 75g，1mol/L HCl 177ml，三乙醇胺28ml，MgCl2·6H2O 1.0g，CaCl2·2H2O 0.2g。先將NaCl 溶于700 ml蒸餾水中，再加入HCl和三乙醇胺。將MgCl2·6H2O和CaCl2·2H2O分別 用2 ml蒸餾水溶解后，逐一加入，再用蒸餾水加至1000 ml，4℃保存。臨用前取上述溶液1份加9份蒸餾水，4℃保存待用。
3.2%SRBC懸液：新鮮脫纖維羊血或Alsever液保存羊血（4℃可保存3周）用生理鹽水洗2次，第三次用緩沖鹽水，2000rpm離心30min。取壓積紅細(xì)胞以緩沖鹽水配成2%懸液。為使?jié)舛葮?biāo)準(zhǔn)化，可將2%SRBC懸液用緩沖鹽水稀釋25倍，于分光光度計(jì)（542nm）測定透光率（以緩沖鹽水校正透光率至）。每次實(shí)驗(yàn)用紅細(xì)胞濃度（透光率）必須一致。
4.生理鹽水
5.溶血素（anti-SRBC）：按說明書所標(biāo)效價(jià)以緩沖鹽水稀釋至2單位。如效價(jià)為1：8000，使用時(shí)1：4000稀釋。
6.致敏SRBC：2%SRBC加等量2單位溶血素，混勻，置37℃水浴10min。
7.50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管：取2%SRBC懸液0.5ml，加入蒸餾水4.5ml，混勻。
8.37℃水浴箱
9.離心機(jī)
10. 分光光度計(jì)
11. 試管、吸管
【方法】
1.取待檢人血清0.2ml，加入緩沖鹽水3.8ml，使成1：20稀釋。
2.按下表所示加入各試劑，混勻，將試管置于37℃水浴30min。
表 CH50法測定總補(bǔ)體活性操作
試管編號(hào) 1：20稀釋血清（ml） 緩沖鹽水（ml） 致敏SRBC（ml） CH50（U/ml） 1 0.10 1.40 1.0 200
2

0.15 1.34 1.0 133 3 0.20 1.30 1.0 100 4 0.25 1.25 1.0 80 5 0.30 1.20 1.0 66.6 6 0.35 1.15 1.0 57.1 7 0.40 1.10 1.0 50 8 0.45 1.05 1.0 44.4 9 0.50 1.00 1.0 40 10 一 1.50 1.0 一 【結(jié)果】
將各試管2500rpm離心5min，取上清液與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管目視比較，觀察溶血程度。取與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相接近的兩管在分光光度計(jì)上分別讀取光密度值A(chǔ)542nm （0.5cm比色杯，以緩沖鹽水作為空白調(diào)零），以zui接近50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管的一管，按下列公式計(jì)算CH50活性。

本法測定的正常值范圍為50-100 U/ml。
【討論】
1.操作注意事項(xiàng)
（1）待檢血清標(biāo)本應(yīng)無溶血、無乳糜、無污染。
（2） 緩沖液、致敏SRBC均應(yīng)新鮮配制，緩沖液若被細(xì)菌污染，會(huì)導(dǎo)致自發(fā)溶血。
（3）待檢血清標(biāo)本必須新鮮，如室溫放置2h以上，會(huì)使補(bǔ)體活性下降。
（4） 實(shí)驗(yàn)所用玻璃器皿，一定要清潔，酸堿均能影響測定的準(zhǔn)確性。
（5） 測定需在0℃-4℃進(jìn)行，試管需預(yù)冷，可保持補(bǔ)體活性。
（6） 補(bǔ)體的溶血活性與反應(yīng)時(shí)緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、鈣鎂離子量、羊紅細(xì)胞量、反應(yīng)總體積及反應(yīng)溫度均有一定關(guān)系，因此實(shí)驗(yàn)時(shí)需對反應(yīng)的各個(gè)環(huán)節(jié)做嚴(yán)格控制。
2.方法學(xué)評價(jià)
（1）本法簡便快速，但敏感性較低，不能測定補(bǔ)體蛋白的值。
（2）總補(bǔ)體活性的測定主要反映補(bǔ)體C1~C9通過經(jīng)典途徑活化的程度。
3.臨床意義
（1） 在急性炎癥、感染、組織損傷（如風(fēng)濕熱急性期、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎、皮肌炎、傷寒、Reiter綜合征和多發(fā)性結(jié)節(jié)炎）、癌腫、骨髓瘤等時(shí)，?？梢娧a(bǔ)體含量增高。
（2） 低補(bǔ)體血癥多見于急性腎小球腎炎、膜增殖性腎小球腎炎、SLE活動(dòng)期、RA、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、急性乙型病毒性肝炎、遺傳性血管神經(jīng)性水腫等。