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葡聚糖凝膠分離的目的在于“分子量”
點(diǎn)擊次數(shù)：1175 發(fā)布時(shí)間：2014-6-9
摘要：葡聚糖凝膠常用凝膠濾過法的目的在于達(dá)到分離，它在制備的過程中會(huì)遇到的問題及如何解決一下問題，下面詳細(xì)介紹。
*、葡聚糖凝膠常用的方法：
多糖的分子量測定常用的是凝膠濾過法。對于黏度大的多糖，可采用黏度法求得。亦有用蒸汽壓滲透法。
原理：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn)SDS， SDS能斷裂分子內(nèi)和分子間氫鍵，破壞蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu)，強(qiáng)還原劑能使半*之間的二硫鍵斷裂，蛋白質(zhì)在一定濃度的含有強(qiáng)還原劑的SDS溶液中，與SDS分子按比例結(jié)合，形成帶負(fù)電荷的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，這種復(fù)合物由于結(jié)合大量的SDS，使蛋白質(zhì)喪失了原有的電荷狀態(tài)形成僅保持原有分子大小為特征的負(fù)離子團(tuán)塊，從而降低或消除了各種蛋白質(zhì)分子之間天然的電荷差異，由于SDS與蛋白質(zhì)的結(jié)合是按重量成比例的，因此在進(jìn)行電泳時(shí)，蛋白質(zhì)分子的遷移速度取決于分子大小。
第二、葡聚糖凝膠測定糖分子量不同觀察角度
利用不同方法測定多糖分子量可以從不同角度對多糖分子量進(jìn)行確證，同時(shí)也是對多糖純度的考察。在測定過程中要注意標(biāo)準(zhǔn)品的選擇，盡量使用與被測多糖結(jié)構(gòu)相似的標(biāo)準(zhǔn)品，因?yàn)椴煌Y(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)品雖然其分子量相同而在一定條件下所表現(xiàn)的分子量會(huì)有所不同。多糖分子量的測定沒有一種的方法，其分子量只代表相似鏈長的平均配比而不是確切的分子大小。往往用不同的方法會(huì)得到不同的分子量。
第三、葡聚糖凝膠制備過程
制備過程編輯葡聚糖凝膠微珠表面形態(tài)存在粒子凝集和表面粗糙兩種不良情況。粒子凝集的原因是分散劑聚醋酸乙烯酯(PVAc)在堿性條件下水解導(dǎo)致親水性增強(qiáng)，以及交聯(lián)反應(yīng)的中間產(chǎn)物具有絮凝作用。另外，交聯(lián)后粒子粘度增大也可導(dǎo)致凝集。葡聚糖微珠表面粗糙是由于后處理時(shí)PVAc的微小附著物沒有從微珠表面*除去而造成的。作者采取低溫分散、交聯(lián)，分步加入交聯(lián)劑和調(diào)節(jié)攪拌速度等控制手段，有效地解決了上述問題。
第四、葡聚糖凝膠分離的目的
葡聚糖凝膠是由直鏈的葡聚糖分子和交聯(lián)劑3—氯1，2—環(huán)氧丙烷交聯(lián)而成的具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。凝膠顆粒中網(wǎng)孔的大小可通過調(diào)節(jié)葡聚糖和交聯(lián)劑的比例來控制，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)越緊密；交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越疏松，網(wǎng)孔的大小決定了被分離物質(zhì)能夠自由出入凝膠內(nèi)部的分子量范圍?？煞蛛x的分子量范圍從幾百到幾十萬不等。
葡聚糖凝膠層析，是使待分離物質(zhì)通過葡聚糖凝膠層析柱，各個(gè)組分由于分子量不相同，在凝膠柱上受到的阻滯作用不同，而在層析柱中以不同的速度移動(dòng)。分子量大于允許進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔范圍的物質(zhì)*被凝膠排阻，不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，阻滯作用小，隨著溶劑在凝膠顆粒之間流動(dòng)，因此流程短，而先流出層析柱；分子量小的物質(zhì)可*進(jìn)入凝膠顆粒的網(wǎng)孔內(nèi)，阻滯作用大，流程延長，而zui后從層析柱中流出。若被分離物的分子量介于*排阻和*進(jìn)入網(wǎng)孔物質(zhì)的分子量之間，則在兩者之間從柱中流出，由此就可以達(dá)到分離目的。