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雞白痢、雞傷寒抗體說(shuō)明，Anti-pullorum價(jià)格

時(shí)間：2013-2-25閱讀：809
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雞白痢、雞傷寒抗體說(shuō)明，Anti-pullorum價(jià)格

1. WB

A.樣品準(zhǔn)備

注意：細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品包括經(jīng)典和特殊培養(yǎng)基，血清，培養(yǎng)基添加物，誘導(dǎo)物，抗生素。產(chǎn)品列表等信息請(qǐng)登陸查詢(xún)。

單層細(xì)胞

 

室溫下，移去培養(yǎng)基并用PBS沖洗直徑100mm的培養(yǎng)皿。以下步驟均在冰上或4℃操作，使用冰預(yù)冷的新鮮緩沖液。

 

加入0.6ml RIPA裂解液（sc-24948）。4℃輕輕晃動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)皿15min。用細(xì)胞刮將貼壁細(xì)胞刮下。轉(zhuǎn)移裂解液至微量離心管內(nèi)。

 

用0.3ml RIPA裂解液洗一次培養(yǎng)皿，將洗液與之前的溶解物合并。（可選擇：加入10μl 10mg/ml PMSF（sc-3597）儲(chǔ)存液和/或用21號(hào)注射器針頭切割DNA）冰上孵育30-60min。

 

將細(xì)胞溶解物4℃離心，10000×g，10min。轉(zhuǎn)移漢細(xì)胞裂解物的上清至新的離心管內(nèi)，棄沉淀。

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注意：涉及磷酸化作用研究時(shí)，可用PhosphoCruTM蛋白純化試劑盒（sc-24964）富集純化細(xì)胞溶解物中的磷酸化蛋白。

懸浮細(xì)胞

 

室溫低速離心5min，收集約2.0×107個(gè)細(xì)胞。小心除去培養(yǎng)基。

 

室溫下用PBS沖洗細(xì)胞沉淀，再次低速離心5min，小心除去培養(yǎng)基。

 

加入1.0ml冰預(yù)冷的RIPA裂解液（sc-24948），裂解液中現(xiàn)用現(xiàn)加入蛋白酶抑制劑和/或磷酸酶抑制劑。用移液器輕輕懸浮細(xì)胞，冰上孵育30min。

 

用21號(hào)注射器針頭、杜恩斯勻漿器或超聲進(jìn)一步破壞使細(xì)胞均質(zhì)化。注意不要使裂解物溫度過(guò)高。（可選擇：加入10μl 10mg/ml PMSF（sc-3597）儲(chǔ)存液。）冰上孵育30min。

 

將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管，4℃離心，10000×g，10min。轉(zhuǎn)移上清至新的離心管內(nèi)，棄去沉淀。

 

 

注意：涉及磷酸化作用研究時(shí)，可用PhosphoCruTM蛋白純化試劑盒（sc-24964）富集純化細(xì)胞溶解物中的磷酸化蛋白。

組織樣品

 

稱(chēng)重組織塊，并用干凈的剃刀剪碎。冰凍組織可被切的很薄，并在含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液（sc-24948）中解凍。3ml冰預(yù)冷的RIPA/g組織。

 

杜恩斯勻漿器或超聲進(jìn)一步破壞使細(xì)胞均質(zhì)化，溫度維持在4℃。（可選擇：加入30μl 10mg/ml PMSF（sc-3597）儲(chǔ)存液/g組織。）冰上孵育30min。

 

將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管，4℃離心，10000×g，10min。棄沉淀?？杉娱L(zhǎng)離心時(shí)間獲得更好的裂解產(chǎn)物。

 

 

注意：涉及磷酸化作用研究時(shí)，可用PhosphoCruTM蛋白純化試劑盒（sc-24964）富集純化細(xì)胞溶解物中的磷酸化蛋白。

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