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YIJI*-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白*酶切試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI*-S-轉(zhuǎn)移酶融合蛋白*酶切試劑是一種旨在通過*的特異作用序列，達(dá)到重組表達(dá)目標(biāo)多肽與融合克隆載體的分離，而獲得純化目標(biāo)蛋白的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種pGEX T表達(dá)載體上融合或標(biāo)記在*-S-轉(zhuǎn)移酶上目標(biāo)蛋白的分離純化。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，分離效率高。

技術(shù)背景

研究編碼蛋白首先通過重組DNA技術(shù)在細(xì)菌中表達(dá)，其中*-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）融合蛋白系統(tǒng)有效地幫助目的基因獲得高表達(dá)的目標(biāo)蛋白。目的基因被引入到細(xì)菌中高度表達(dá)的*-S-轉(zhuǎn)移酶基因，利用該基因的表達(dá)系統(tǒng)，避免了翻譯過程中影響表達(dá)的各種因素，從而得到滿意的表達(dá)產(chǎn)物。*（Thrombin），分子量37Kd，是一種內(nèi)源性蛋白酶，將原纖維蛋白（fibrinogen）切離為纖維蛋白（fibrin），促進(jìn)血液凝固。其切離序列為LeuValProArg¯GlySer，出現(xiàn)在大多數(shù)表達(dá)載體，便于獲取目標(biāo)蛋白。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI緩沖液（Reagent A） 微升

YIJI酶解液（Reagent B）      微升

YIJI補(bǔ)充液（Reagent C）      毫升

產(chǎn)品說明書     1份

保存方式

保存YIJI酶解液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于反應(yīng)操作和保存樣本的容器

平式搖蕩儀：用于混勻反應(yīng)物

微型臺式離心機(jī)：用于沉淀反應(yīng)物

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，準(zhǔn)備好GST樹脂純化操作，直至洗脫處理前；同時將YIJI酶解液（Reagent B）從－20℃冰箱里取出，在冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。

• 準(zhǔn)備1個1.5毫升離心管
• 移入已經(jīng)含有目標(biāo)蛋白結(jié)合處理的GST樹脂（注意：未經(jīng)洗脫處理）
• 或直接使用剛剛操作的GST樹脂（注意：未經(jīng)洗脫處理）
• 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入xx微升YIJI緩沖液（Reagent A）
• 加入xx微升YIJI酶解液（Reagent B）
• 加入xx微升YIJI補(bǔ)充液（Reagent C）
• 輕柔渦旋震蕩5秒，混勻
• 放進(jìn)20℃恒溫水槽孵育16小時
• 或平放在平式搖蕩儀上，在20℃溫度下孵育16小時，速度為50RPM
• 放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心移取上清液到預(yù)冷的新的1.5毫升離心管
• 即刻放進(jìn)－70℃冰箱里保存
• 或移取2至5微升進(jìn)行SDS-PAGE電泳鑒定目標(biāo)蛋白片段

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 操作時，須戴手套
• YIJI酶解液（Reagent B）避免反復(fù)凍融，建議分裝 
• YIJI酶解液（Reagent B）的切離能力取決于融合蛋白的三維結(jié)構(gòu)、序列位置等各種因素；通常10微升即0.5單位YIJI酶解液（Reagent B）可以切離500微克目標(biāo)蛋白，其切離效率可達(dá)95% 
• 增加切離能力的方法是：測試各種濃度的YIJI酶解液（Reagent B）、孵育溫度（4至37℃）和孵育時間（2至16小時）
• 避免樣品中含有PMSF、DTT、UREA等
• 避免過量使用YIJI酶解液（Reagent B）
• 如果純化效果欠佳，建議使用PROTEASE（YIJI GST融合蛋白PROTEASE酶切試劑盒-yiji30070.1）、或因子10a（YIJI GST融合蛋白因子10a酶切試劑盒-yiji30070.3）等酶切 
• 本公司提供系列融合蛋白處理試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離效果滿意
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含有HBsAg and HIV抗原

上海一基實(shí)業(yè)有限公司

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